Цито мгсу: ИДО МГСУ дистанционное обучение – тестирование, курсовые, РГР, лабораторные работы, помощь студентам на учебном портале МГСУ.

ИДО МГСУ дистанционное обучение – тестирование, курсовые, РГР, лабораторные работы, помощь студентам на учебном портале МГСУ.

Уважаемые студенты ИДО МГСУ!

Вот уже 12 лет я оказываю помощь студентам ИДО. Это происходит с того момента, как ИДО провел первый набор в 2009 году. Для специальности ПГС делаю все без исключения курсовые, контрольные, тесты, а также выпускные дипломные работы. Для спициальностей ТГВ и ВИВ я выполняю примерно 70% всех дисциплин. А вообще, курсовые, контрольные работы для студентов заочников и вечерников МГСУ делаю с 2003 года.

Полный список предметов с ценами смотрите здесь

Работы для магистров (отдельный сайт)

Выполняю работы для студентов МГСУ ИДО по предметам:

Математика, физика, химия, информационные технологии, инженерная графика, сопротивление материалов, основы архитектурно-строительного проектирования, основы геотехники, инженерная геология, инженерная геодезия, геодезические работы в строительстве, техническая механика, строительная механика, теоретическая механика, водоснабжение и водоотведение, архитектура, металлические конструкции, железобетонные конструкции, конструкции из дерева и пластмасс, теплогазоснабжение и вентиляция, строительные машины, английский, строительная механика, средства механизации, философия.

 

 

СКИДКА для студентов 1-го курса до 14 января 2022 года:

Физика – 3000 р. (Домашнее задание + контрольная + 4 лабораторные)

Математика – 3000 р. (контрольная + домашнее задание №1, №2, №3)

Возможны и другие скидки, все зависит от количества предметов, перезачетов и т.д.

Скидка для старших курсов до 1 ноября 2021 года:

Электротехника – 2500 р. (домашняя + контрольная + тестирование + 4 лабораторные)

Основы геотехники – 2500 р. (тестирование + пять лабораторных + контрольная)

Теоретическая механика – 2000 р.

Техническая механика – 2000 р. (две РГР)

Сопромат – 3000 р. (домашняя + контрольная + защита отчета по лабораторным в виде тестирования)

Основы теплогазоснабжения и вентиляции – 2000 р. (две домашние + контрольная + итоговое тестирование)

ЖБК часть 1 – 4000 р. (курсовая + тестирование + лабораторные)

КДиП – 4000 р. (курсовая + лабораторные)

Средства механизации – 2500 р. (контрольная + тестирование + защита лабораторных)

 

• Высокое качество
• Низкие цены
• Срок выполнения 1-2 дня
• Возможность встречи в МГСУ
• Гарантия и доработки
• Скидки до 40%

 

pgsmgsu@yandex. ru

8-926-282-04-51

Илья

Заочная дистанционная магистратура ИДО МГСУ, выполнение работ на учебном портале cito.mgsu, помощь магистрам, тестирование, курсовые, сессия под ключ.

С недавних пор получить диплом магистра в МГСУ можно также в институте ИДО – дистанционно. Студентам, обучающимся в магистратутре ИДО МГСУ дистанционно, нужно сдать тестирования, курсовые работы и все остальное, что требуется для успешной учебы.

Выполняю курсовые, тестирование, ВКР (дипломы).

При большом объеме готов делать скидку.

Почти все дисциплины у специальностей ПГС, ИСИ и ТОС разные, поэтому цены размещены на отдельных соответствующих страницах.

Ниже я постарался дать краткие ответы на наиболее часто повторяющиеся вопросы относительно выполнения тестирований, учебных заданий и курсовых работ в МГСУ на факультете ИДО.

Для бакалавров ИДО МГСУ и ДПО МГСУ есть специальные сайты по ссылкам ниже

Вопрос	Ответ
Как давно вы работаете со студентами?	Начал делать студенческие работы в 2000 году, в МГСУ с 2003 года, ИДО с 2009 года.
Что нужно чтобы заказать тестирование, курсовую?	Нужно написать на почту список работ, также можно прислать логин и пароль
Обязательно присылать логин и пароль от учебного портала?	Нет, не обязательно
Можно сдать тест с ноутбука студента?	Да, можно встретится в МГСУ и сдать с вашего ноутбука
Можно сдать тест через TeamViewer?
Какая связь вам наиболее удобна?	Электронная почта
Можно ли писать на whatsapp?	Можно, но электронная почта лично для меня удобнее
Даете ли вы гарантию и в чем она заключается?	Да, гарантия есть. Она состоит в том, что тестирование будет сдано на положительную оценку (не ниже тройки). Курсовые работы выполняются в соответствии с заданием, все доработки бесплатные и в кратчайшие сроки.
Какой срок выполнения тестирования на портале ИДО МГСУ?	Срок выполнения тестирований на портале МГСУ 1-2 дня.
Какой срок выполнения курсовых работ?	Июль – ноябрь, март, апрель – от 1 до 3 дней. Декабрь, январь, май, июнь – от 1 до 7 дней. Общий принцип такой – чем ближе сессия, тем больше нужно времени для выполнения курсовых работ.
Есть ли готовые курсовые работы?	Да, есть готовые курсовые работы.
Есть ли скидки на курсовые работы и тестирование?	Да, скидки есть. Чем больше объем работ, тем больше скидка.
Есть ли отдельные скидки на готовые курсовые работы?	Есть.
Как происходит оплата и передача работ?	Сначала я выполняю курсовую (лабораторную и т.д.), затем мы встречаемся в МГСУ, вы проверяете соответствие работы заданию, затем оплата. Если вы не можете приехать в МГСУ, то возможна оплата на карту, после оплаты высылаю курсовую на электронную почту.
Как вы сдаете тестирование?	Мы встречаемся в МГСУ, я сдаю тест в вашем присутствии, затем оплата. Если у вас нет возможности приехать в МГСУ, то в этом случае сначала оплата на карту, затем я сдаю тестирование.
Вы дорабатываете чужие работы?	Нет.
Что значит сессия “под ключ”?	Это значит что я самостоятельно загружаю работы на учебный портал МГСУ и отслеживаю проверку работ преподавателем. В этом случае цена отличается в большую сторону от той что написана на сайте примерно на 10-20%, скидки также не предусмотрены.
Вы сотрудничаете с преподавателями, кураторами, деканатом?	НЕТ!!!

Курсовые, контрольные, рефераты, тесты и Дипломные работы (ВКР)

АРХИТЕКТУРА (Зачетное задание)	Ячейка 2 строки 1
АРХИТЕКТУРА (Курсовой проект)	Ячейка 2 строки 2
АРХИТЕКТУРА ГРАЖДАНСКИХ И ПРОМЫШЛЕННЫХ ЗДАНИЙ 1 часть (Курсовой проект – Общественные здания)	Ячейка 2 строки 2
АРХИТЕКТУРА ГРАЖДАНСКИХ И ПРОМЫШЛЕННЫХ ЗДАНИЙ 1 часть (Экзамен 1 семестр)	Ячейка 2 строки 2
АРХИТЕКТУРА ГРАЖДАНСКИХ И ПРОМЫШЛЕННЫХ ЗДАНИЙ 2 часть (Курсовой проект – Промышленные здания)	Ячейка 2 строки 2
АНГЛИЙСКИЙ ЯЗЫК (Контрольная работа №1 ( 1 семестр))	Ячейка 2 строки 2
АНГЛИЙСКИЙ ЯЗЫК (Зачетный тест №1 ( семестр 1))	Ячейка 2 строки 2
АНГЛИЙСКИЙ ЯЗЫК (контрольная работа № 2 (2 cеместр))	Ячейка 2 строки 2
АНГЛИЙСКИЙ ЯЗЫК (Экзамен (2 семестр))	Ячейка 2 строки 2
БЕЗОПАСНОСТЬ ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТИ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ВОДОСНАБЖЕНИЕ И ВОДООТВЕДЕНИЕ регионы (Курсовая работа)	Ячейка 2 строки 2
ГЕОДЕЗИЧЕСКИЕ РАБОТЫ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (РГР)	Ячейка 2 строки 2
ГЕОДЕЗИЯ (Контрольная)	Ячейка 2 строки 2
ГЕОДЕЗИЯ (Построение топоплана)	Ячейка 2 строки 2
ГЕОЛОГИЯ (Защита лабораторной работы по горным породам)	Ячейка 2 строки 2
ГЕОЛОГИЯ (Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
ГЕОЛОГИЯ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
МЕХАНИКА ГРУНТОВ (Контрольное тестирование)	Ячейка 2 строки 2
МЕХАНИКА ГРУНТОВ (Отчет по лабораторным работам)	Ячейка 2 строки 2
МЕХАНИКА ГРУНТОВ (Зачетное задание)	Ячейка 2 строки 2
ИСТОРИЯ АРХИТЕКТУРЫ И СТРОИТЕЛЬНОЙ ТЕХНИКИ (Реферат)	Ячейка 2 строки 2
ИНЖЕНЕРНАЯ ГРАФИКА для бакалавров 2 часть (Раздел Инженерная графика, Строительное черчение)	Ячейка 2 строки 2
ИНЖЕНЕРНАЯ ГРАФИКА для бакалавров 2 часть (Раздел Инженерная графика, Проекционное черчение)	Ячейка 2 строки 2
ИНФОРМАТИКА (Контрольная работа (1й семестр))	Ячейка 2 строки 2
ИНФОРМАТИКА (Контрольная работа (2й семестр))	Ячейка 2 строки 2
ИНФОРМАТИКА (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ИНФОРМАТИКА 2 часть (Контрольная работа (2й семестр))	Ячейка 2 строки 2
ИНФОРМАТИКА 2 часть (Итоговое тестирование (2й семестр))	Ячейка 2 строки 2
КОМПЬЮТЕРНОЕ ПРОЕКТИРОВАНИЕ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
КОМПЬЮТЕРНОЕ ПРОЕКТИРОВАНИЕ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Реферат)	Ячейка 2 строки 2
КОНСТРУКЦИИ ИЗ ДЕРЕВА И ПЛАСТМАСС (Зачетное тестирование)	Ячейка 2 строки 2
КОНСТРУКЦИИ ИЗ ДЕРЕВА И ПЛАСТМАСС (Курсовой проект)	Ячейка 2 строки 2
КОМПЛЕКСНАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
КОМПЛЕКСНАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Лабораторным работа)	Ячейка 2 строки 2
МАТЕМАТИКА	Ячейка 2 строки 2
МАТЕМАТИКА II ЧАСТЬ (Теория вероятности и математическая статика) (Контрольная работа №1)	Ячейка 2 строки 2
МАТЕМАТИКА II ЧАСТЬ (Теория вероятности и математическая статика) (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ПРАВОВЕДЕНИЕ. ОСНОВЫ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВА В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
ПРАВОВЕДЕНИЕ. ОСНОВЫ ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВА В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
Производство СМР при реконструкции зданий и сооружений (контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
РУССКИЙ ЯЗЫК И КУЛЬТУРА РЕЧИ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
РУССКИЙ ЯЗЫК И КУЛЬТУРА РЕЧИ (Промежуточный контроль. Эссе)	Ячейка 2 строки 2
СОЦИОЛОГИЯ В СТРОИТЕЛЬНОЙ СФЕРЕ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАТИКА (Практическая работа)	Ячейка 2 строки 2
СОПРОТИВЛЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ Регионы для бакалавров 1 часть (РГР 4)	Ячейка 2 строки 2
СОПРОТИВЛЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ Регионы для бакалавров 1 часть (Отчет по лабораторным работам № 1 и № 2)	Ячейка 2 строки 2
СОПРОТИВЛЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ Регионы для бакалавров 1 часть (РГР 6)	Ячейка 2 строки 2
СОПРОТИВЛЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ Регионы для бакалавров 2 часть (РГР 5)	Ячейка 2 строки 2
СОПРОТИВЛЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ Регионы для бакалавров 2 часть (Отчет по лабораторным работам №3 и №4)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНАЯ МЕХАНИКА для бакалавров 1 часть (Контрольное задание №2)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНАЯ МЕХАНИКА для бакалавров 1 часть (Контрольное задание №3)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНАЯ МЕХАНИКА для бакалавров 2 часть (РГР 1)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНАЯ МЕХАНИКА для бакалавров 2 часть (РГР 2)	Ячейка 2 строки 2
СПЕЦ. КУРС ПО ТЕХНОЛОГИИ И ОРГАНИЗАЦИИ СТРОИТЕЛЬСТВА	Ячейка 2 строки 2
СОВРЕМЕННЫЕ МАТЕРИАЛЫ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Выполнение практических работ)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНЫЕ КОНСТРУКЦИИ (РГР 1 семестр)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНЫЕ КОНСТРУКЦИИ (РГР 2 семестр)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНЫЕ КОНСТРУКЦИИ (Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНЫЕ КОНСТРУКЦИИ (Курсовой проект)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНЫЕ КОНСТРУКЦИИ (Экзамен)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНЫЕ КОНСТРУКЦИИ (Зачет)	Ячейка 2 строки 2
СОВРЕМЕННЫЕ МАТЕРИАЛЫ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Выполнение практических работ)	Ячейка 2 строки 2
СТРОИТЕЛЬНЫЕ МАШИНЫ И ОБОРУДОВАНИЕ (Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
ЖЕЛЕЗОБЕТОННЫЕ И КАМЕННЫЕ КОНСТРУКЦИИ 1 часть (Зачет по курсу ЖБК)	Ячейка 2 строки 2
ЖЕЛЕЗОБЕТОННЫЕ И КАМЕННЫЕ КОНСТРУКЦИИ 1 часть (Отчет по лабораторным работам)	Ячейка 2 строки 2
ЖЕЛЕЗОБЕТОННЫЕ И КАМЕННЫЕ КОНСТРУКЦИИ 1 часть (Практические работы (только для бакалавриата)	Ячейка 2 строки 2
МЕТАЛЛИЧЕСКИЕ КОНСТРУКЦИИ (включая сварку) 1 часть (Зачетное задание – Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
МЕТАЛЛИЧЕСКИЕ КОНСТРУКЦИИ (включая сварку) 2 часть (Курсовой проект № 2)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВАНИЯ И ФУНДАМЕНТЫ 1 часть (Курсовой проект часть I, первый семестр)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВАНИЯ И ФУНДАМЕНТЫ 2 часть (Курсовой проект часть II, второй семестр)	Ячейка 2 строки 2
ОТОПЛЕНИЕ ГРАЖДАНСКОГО ЗДАНИЯ (Курсовой проект)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ МЕТРОЛОГИИ, СТАНДАРТИЗАЦИИ, СЕРТИФИКАЦИИ И КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА (зачёт)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ ОРГАНИЗАЦИИ И УПРАВЛЕНИЯ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Зачетное задание + Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ ОРГАНИЗАЦИИ И УПРАВЛЕНИЯ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Курсовая работа)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ ТЕХНОЛОГИИ ВОЗВЕДЕНИЯ ЗДАНИЙ (Курсовой проект)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ ТЕХНОЛОГИИ ВОЗВЕДЕНИЯ ЗДАНИЙ (Дистанционный экзамен (только регионы!))	Ячейка 2 строки 2
ОБЩАЯ ЭЛЕКТРОТЕХНИКА И ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЕ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ОБЩАЯ ЭЛЕКТРОТЕХНИКА И ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЕ (РГР №1)	Ячейка 2 строки 2
ОБЩАЯ ЭЛЕКТРОТЕХНИКА И ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЕ (РГР №2)	Ячейка 2 строки 2
ОБЩАЯ ЭЛЕКТРОТЕХНИКА И ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЕ (Отчет по лабораторным работам)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ ТЕПЛОТЕХНИКИ (Расчетно-графическая работа)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ ГИДРАВЛИКИ (Зачетное задание)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ ГИДРАВЛИКИ (Отчет по всем лабораторным работам)	Ячейка 2 строки 2
ОСНОВЫ МИКРОКЛИМАТА (Курсовая работа)	Ячейка 2 строки 2
ОРГАНИЗАЦИЯ, УПРАВЛЕНИЕ И ПЛАНИРОВАНИЕ СТРОТЕЛЬНОГО ПРОИЗВОДСТВА (Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
ОРГАНИЗАЦИЯ, УПРАВЛЕНИЕ И ПЛАНИРОВАНИЕ СТРОТЕЛЬНОГО ПРОИЗВОДСТВА (Курсовая работа)	Ячейка 2 строки 2
ТЕПЛОГАЗОСНАБЖЕНИЕ И ВЕНТИЛЯЦИЯ (Курсовая работа)	Ячейка 2 строки 2
ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ (Курсовой проект)	Ячейка 2 строки 2
ТЕХНИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА 1 часть (РГР 1)	Ячейка 2 строки 2
ТЕХНИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА 1 часть (РГР 2)	Ячейка 2 строки 2
ТЕХНИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА 1 часть (РГР 3)	Ячейка 2 строки 2
ТЕХНИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА 1 часть (Отчет по лабораторным работам)	Ячейка 2 строки 2
ТЕХНИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА 2 часть	Ячейка 2 строки 2
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА РГЗ 1, 2 (кинематика)	Ячейка 2 строки 2
ТЕПЛОФИЗИКА (Курсовая работа)	Ячейка 2 строки 2
УПРАВЛЕНИЕ ПРОЕКТАМИ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
УПРАВЛЕНИЕ ПРОЕКТАМИ (Реферат)	Ячейка 2 строки 2
ХИМИЯ В СТРОИТЕЛЬСТВЕ	Ячейка 2 строки 2
ФИЛОСОФИЯ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ФИЛОСОФИЯ (Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
Физическая культура и спорт 1 часть (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ФИЗИКА	Ячейка 2 строки 2
ХИМИЯ	Ячейка 2 строки 2
ЭКОЛОГИЯ (Контрольная работа)	Ячейка 2 строки 2
ЭКОЛОГИЯ (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ЭКОНОМИКА (Контрольная работа – тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ЭКОНОМИКА (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2
ЭКОНОМИКА ОТРАСЛИ СТРОИТЕЛЬСТВА (Итоговое тестирование)	Ячейка 2 строки 2

Подобрать репетитора по русскому языку.

Репетитор по русскому языку

Не выбрано МГУ им. Ломоносова АПИ при ИГиП РАН Финансовый университет (бывш. ГУМФ) АГПС МЧС России АГЗ МЧС России АМИ РАНХиГС при Президенте РФ (АНХ при Правительстве РФ, РАГС при Президенте РФ) МИГУП (бывш. АПУ) АТиСО АУ МВД РФ АФПС РФ АФСБ РФ АХИ им. В. С. Попова АЭИ АЭиУ АРБИ ВА РВСН им. Петра Великого (бывш. ВА им. Дзержинского) ВИУ МО РФ ВУНЦ ВВС ВВА им. проф. Н.Е. Жуковского и Ю.А. Гагарина (бывш. ВВИА) ВУ МО РФ (бывш. ВПА им. Ленина) ВУРХБЗ ИСВ (бывш. ВУ) ВАВТ Финансовый университет (бывш. ВГНА) ВГИК ВКШ МЭРТ ВТШ С. Мелконяна ВШ ГМУ ВШПП ВШП ВШСО ВТУ им. Щепкина ТИ им. Щукина (бывш. ВТУ им. Щукина) ВИУ ГАСИС ГАСК ГКА им. Маймонида Гос. ИРЯ им. Пушкина ГМПИ им. Ипполитова-Иванова РГСАИ (бывш. ГСИИ) НИУ ВШЭ (ГУ-ВШЭ) ГАУГН (бывш. ГУГН) ГУЗ ГУУ ГЭИ ГЭИТИ Гуманитарный институт ГИТР МГПИ (ныне МГПУ) ДА МИД РФ МОИУП Юринфор ИБП (до 2013 г.) ИБПМ МОИУ (бывш. ИБПИТ) ИБПУ РГИС (ВСК) ИГУ МГИМО МИД РФ ИГА ИГиМУ ГУУ ИГУМО ИДК ИНЕСНЭК ИЖЛТ ИИТЭМ ИИР ИК ИКиП ИКСИ АФСБ РФ ИМБО ИМПЭ им. Грибоедова ИМТП ИМЭС ИМПиПП ИМЭ ИМЭИ (мировой экономики и информатизации) ИПВ ИПО ИПП ИРЭСПиП ИСБ ИСИ ИСБТиСУ ИСН ИССО ИНЭКБИ ИЭиК ИЭП ИНЭП ИЭКП РАМА ИЭФП ИЭПиУР ИЯиК им. Л. Толстого ЛИ им. Горького МАТИ МВШ МИГМТ МИМ Линк МИЭП МНЭПУ МИЭПП при МНЭПУ МСИ им. Державина МУМ МЮИ НОУ МТИ МАП (международная) МГИИТ им. Ю.А. Сенкевича (бывш. МАТГР) МАЭП МГАВМиБ им. К.И. Скрябина (бывш. МВА) МГАВТ МГУПИ МИТХТ МГАФК (Мосспортакадемия) МГАХ МГК им. Чайковского МГУТУ им. К.Г. Разумовского (бывш. МГТА, ВЗИПП) Университет имени О. Е. Кутафина (МГЮА) Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (бывш. ММА им. Сеченова) Мирбис РГАУ-МСХА им. Тимирязева МФЮА МАИ МАрхИ МБИ МВВКУ (бывш. МВИ, МВОКУ им. Верховного Совета РСФСР) МВИРЭКВ МГИЮ МГПУ МГППУ МАДИ МГАУ им. Горячкина МГАХИ им. Сурикова МГВМИ РГГРУ (МГРИ) им. Орджоникидзе МГГУ МГИУ МГАДА (МГИДА, МИДА) МГИМО (У) МИД России МГИМ им. Шнитке МГТУ МИРЭА НИТУ МИСиС МИЭМ НИУ ВШЭ МИЭТ МГЛУ (бывш. МГПИИЯ им. Мориса Тореза) МГМСУ им. А. И. Евдокимова МГГУ (бывш. МГОПУ) им. М. А. Шолохова МГОУ им. Черномырдина МГСУ НИУ (МГСУ-МИСИ) ТИ МГУДТ (бывш. МГТУ им. Косыгина) МГТУГА МГТУ им. Н.Э. Баумана Университет машиностроения (МАМИ) МГТУ Станкин МИИГАиК МГУДТ МГУИЭ (бывш. МИХМ) МГУКИ МГУЛ МГУП им. И. Федорова (бывш. МПИ) МГУПП МГУПБ МГУП (природообустройства) МГУПС (МИИТ) РГУТиС (бывш. МГУС) МЭСИ МГХПА им. Строганова МГЭИ МГИ им. Дашковой НИЯУ МИФИ МИБД МИБУА МИИЯ МГАКХиС (ВЗИСИ) МИМСР МИМБ при ВАВТ МЭРТ РФ МИП МИПП МИГКУ МИУ (управления) МУ им. С.Ю. Витте (бывш. МИЭМП) МИЭПП МКВИ филиал СПБГУКиТ МНЮИ МОСА (бывш. МОСУ) МПГУ (бывш. МГПИ им. Ленина) МПУ МПСУ (бывш. МПСИ) МРИВСЭО МТУСИ МТИ (транспортный) МосУ МВД РФ МУ Туро МФТИ (ГУ) СПбГУП (МФ) СПбИВЭСЭП в Москве МФЭИ МГТА (бывш. МЭЛИ) МЭФИ НОУ МЭИ НИУ МЭИ (МЭИ ТУ) МАХУ памяти 1905 года ЛГУ им. Пушкина в Москве НИБ ИППиП Континент ПМЮИ ИТТ (подмосковный филиал) РАА им. Плевако РАЖВЗ РАМиА РАМ им. Гнесиных РАП (правосудия) РАП (предпринимательства) ГИТИС РГАТиЗ РГУФКСМиТ (ГЦОЛИФК) РМАПО РМАТ (МФ) РПА МЮ РФ РТА РЭУ им. Г. В. Плеханова РГАЗУ РГГУ РГАИС (бывш. РГИИС) РНИМУ (бывш. РГМУ) им. Н.И. Пирогова РОАТ МИИТ (бывш. РГОТУПС, ВЗИИТ) РГТЭУ РГУИТП РГУНГ им. Губкина ИТЛП МГУТУ (бывш. РосЗИТЛП) РосНОУ РПИ Св. Иоанна Богослова РУДН РХТУ им. Менделеева РИУ УГМУ (бывш. РУИ) СДИ СГА СФГА (НОУ СГИ) УНИК МАО (УНН – Натальи Нестеровой) УРАО Финансовый университет (ФА) при Правительстве РФ Школа-студия МХАТ НОУ ЮА МИТРО РГСУ МГОУ (областной) МИФКиС МАБиУ МИР МосГУ МФПУ Синергия (бывш. МФПА, ММИЭИФП) МЭПИ МГГЭИ (бывш. МГСГИ) МИЮ МВШМ МВД СССР (до 1992г.) ИМДТ РАХИ МХПИ ИТиГ РУК (бывш. МУПК) МГУУ Правительства Москвы МГИМ ИЭАУ МСЭИ ИНЭС НИ ВШУ МИМЭМО (бывш. МИМЭО) МИЛ ВШК МоСПИ при МПГУ ПСТГУ МТИ «ВТУ» (бывш. ВТУ ЮНЕСКО) НИЕВ АЭБ МВД РФ (бывш. АНП ФСНП РФ) РИПТИБ (ИМЦ) Институт бизнеса и дизайна (бывш. ИнОБО) Collège Universitaire Français de Moscou БВШД ИМСГС РЭШ НИД МГЛИ СЭИ МИНРО УМЛ при МГК КПСС НИМ ББИ ОИТиР ИГТМ (бывш. ИАЯ) МИРТШБ МосАП при Правительстве Москвы ВИА им. Куйбышева ИПК ИИМ МНИ СИЮ ИОСО РАО МИ 21 МАМАРМЕН ИМЛИ им. Горького МАОК ИМЭМО РАН ВА БТВ ГПИ ПИУ АУМП МПИ ФСБ РФ (бывш. МВИ ФПС РФ) АСОУ МВШБ SSE Russia УСНГ ИЭФ Синергия МИАПП (ИАПП) МВШСЭН ИИС АБиП МИУС НМУ МИП (психоанализа) ИУиИ МЭИ (экономический) МГЮИ РШЧП ИАМТ МОВУКИ УИИТ ВИППКРК МИМО ИФТИ св. Фомы ИРТ ИПИУ ИСОМ СФИ ВАШГД ИГУПИТ ИТЭФ ЭЭИ СГЭИ ИСПЭ МАГМУ ИРДПО ФПИ ПИ РАО ПИЮ ПИП ИСЭ МАБ ИФЭП ОЗ МИКБ (бывш. МАКБ) МСГИ ИКТ МВШЭ ФИ СИП ИЭУП МЭГУ ИПЭ ИКМ ЕУП ВАГШ ВС РФ ОВА ВС РФ (бывш. ВА им. Фрунзе) ИНиСБ МАРТИТ ИУП ИУЭПИ ВГШ им. Дубнова (бывш. ЕУМ) НИСД ВЭГИ ИЭ РАН ИЗиСП при Правительстве РФ ИО РАН МИАН ИГиП РАН МИУ (исламский) СИИЯ ИОН (бывш. АНО) ИЕ РАН НИИ СП РФ МИОО (бывш. МИПКРО) МЮИ МВД РФ ИСК РАН ГАСиЖКК МОЮИ при ПЦПИ Минюста РФ (бывш. ИЭФП) ВКСР ИПУ РАН МТИ (теологический) ИТИРШБ ИСПТ АПК и ППРО ГНИИ РНС ФНС РФ МИПК МГТУ им. Баумана ИРИ РАН ИУВ НМХЦ им. Пирогова ВШИИ МБШ ИПБ России ЦЭПЛ РАН ГИИ РАН ИС РАН ИЯ РАН РИСК (RISC) ИМЕТ РАН ЕАОИ ИСПИ РАН ЗНУИ ИЭПП ИДНТ ИЕК IIC ВШДСИ при РАТИ (ГИТИС) МСДС ТАЕХ ВИЭСХ ИНЭОС РАН ИЛА РАН ГИУВ МО РФ ИПУ Аскери РИК РАН МИЭЭ ФИРО ИПМех РАН ВНИИВСГЭ ИХО РАО ИТТИ ИОФ РАН ВСТИСП ИИП ИПД МФПА ВВИ (бывш. ВВФ при МВА им. Скрябина) ФИАН им. Лебедева РЗТИ МИПК РЭУ им. Г. В. Плеханова ЭПИ ИХ им. Вишневского РАМН СИУС ВКИЯ МЭРТ ИП РАН МУГУ ИОХ РАН МИПК РРиСХП ИНП РАН ЦЭМИ РАН ИЭА РАН им. Н. Н. Миклухо-Маклая МНИОИ им. П. А. Герцена ИИО РАО ИПМ им. М. В. Келдыша РАН ИАф РАН АГПРФ ИМБП РАН ИРЭИ УКУ ИГ РАН ИПНГ РАН ИСЖ ИВИ РАН ИИСТ ИТИ им. П. М. Ершова ИВ РАН ГЭТИ (бывш. АСЭР, Академия «Континент») МУИЦ НИИ РАХ ИХФ РАН МИГИП ИАМ ПГИ “Со-действие” ИНТУИТ МГИ ИПИ ИБХ РАН МВУ (Венский) ВЦ РАН ВНИИФК AIBEc ИСИН ВНШТ НИИОСП им. М. Н. Герсеванова ИСл РАН ИФ РАН ЕБС ИПИ РАН ГОСНИТИ НОУ АРТ ИНФО – Рутения ГИА (GIA) ИДВ РАН ИБГ РАН ИПЭБ МАБТ “Форекс Клуб” ИНЭУМ им. И. С. Брука АИС ИФЗ РАН НИСК ИСВ РАО (бывш. НИИ ОПВ АПН СССР) МАН Сан-Марино ИМАШ РАН им. А. А. Благонравова МФПИ ИПиКП ИКСР НИИ СПиПРЛ ИХТ АИИ ВГКПИ РБУ ИТПИ ИММ РАН МАФСИ НИФХИ ИИЯМС ИАТУ АПРИКТ ИКИ РАН Кора Москва ИПКИР ИППК “Профессионал” ЦНИИТМАШ ИНХС РАН ППДС НИКФИ ИЭСО ИСП РАН МПДАиС ИОНХ РАН ИВП РАН ИСМО РАО ИВМ РАН ИФР РАН ИА РАН ИПКОН РАН РИСИ ИНИОН РАН АСМС РНЦ КИ УМЦ ЖДТ Общецерковная аспирантура им. Кирилла и Мефодия МШУ Сколково МТС МЕИЭФП ИОГен РАН ИНБИ РАН ВИАПИ им. А. А. Никонова ГУ ИМЭИ РТИ им. А. Л. Минца СОПС РАН МИТП РАН ВНИИгеосистем МАСИ ИПТиК ВИНИТИ РАН РАПС (бывш. ИПК МПС России) ИВФ РАО ИРЭ им. В.А. Котельникова РАН НИИ ФХМ Росздрава НИИ ОПП РАМН ЦНИИС ИПКгосслужбы ИФБТ ВИГИС ПАПО ИСОУКиТ ВНИИДАД ИПК ДСЗН ИСП РАО ГКНПЦ им. М. В. Хруничева Академия АйТи IUPFAN Centro Gregorio Fernández АРМО ИИСУ МГААИИ С. Андрияки ИФХЭ РАН МИСБ МАА ВНИИНТПИ ИСО РАО ИМАД Стрелка ИПГ ИИППР ИППД РАО Университет рабочих корреспондентов им. Ульяновой ВНИИЖТ АБиСП МКТА ИЭУСП БОН ИПК ФМБА России САМБ ИСА РАН ВНИИМС ШАД ЦНИИПСК им. Мельникова ИНО ИРЯ РАН НИИ Вирусологии РАМН ИБХФ РАН ОТИ ЭЮИ НИИ ТСС ГосНИИгенетика ИМБ РАН ИЕГО ИРЕА ИГиСП ИДМ ИЭСБ МИСАО НЦССХ им. А. Н. Бакулева РАМН МИГТиК ВНИИПВТИ ВДА ИУ (МскУниверситет) РАКО АПК ЮИ (МскУниверситет) МОСГИ МГИМТ ПУ Первое сентября Touro College – Lander Institute Moscow ИУБ АМИР НИИРПО ИТ (МскУниверситет) ИЭ (МскУниверситет) ИП (МскУниверситет) МОЮИ ЦНИИчермет им. И.П. Бардина ИПСУ ГЕОХИ РАН 25 ГосНИИ химмотологии МО РФ ВИЭВ МОНИКИ им. М.Ф.Владимирского ИТИП РАО ЭНЦ Минздравсоцразвития РФ НАМИ Академия ГРУ НИИ СП им. Склифосовского ИАБиА МАРШ ИНАСАН ГИНФО ИМЭИ (менеджмента, экономики и инноваций) МИКТиР МИНЭКБИК СГЛА ИППИ РАН MBS ЦНИИП градостроительства РААСН ESMOD MOSCOU ИМГ РАН ВФЭУ АВР (бывш. КИ КГБ) ОИВТ РАН МСЕХ НИИ урологии МЗ РФ МНИИП CBS РПУ ВНИИГиМ им. А. Н. Костякова ИНСТЭП ИХП ЦИТО им. Н. Н. Приорова ВНИИнефть им. А. П. Крылова ВШСИ Константина Райкина ММИ “Реавиз” ГНИЦПМ ИГЭ РАН ГНЦССП им. В. П. Сербского НИИОР им. В. А. Неговского РАМН ИФА РАН ВКИЯ МИД РФ Школа-студия ШАР ВНИИА Россельхозакадемии ИВНД РАН МИГп УЦПиДПО РГБ РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского РАМН ИСЭПН РАН MBA School МЭГИ РНЦРР

За несколько месяцев до ЕГЭ нам потребовался репетитор по русскому языку с задачей – подготовка к сочинению. Остановились на Юлии Сергеевне, занятия проводились по Скайпу, 1-2 раза в неделю. Отмечаем пунктуальность и хорошую методологическую подготовку преподавателя. Она сумела ликвидировать…

пробелы нашей дочери по знанию произведений, наконец-то научила ее писать сочинения. Также в ходе занятий дополнительно были «подчищены» хвосты по теории предмета (орфография, грамматика). Как результат, оценка ЕГЭ по русскому языку – 96 баллов! Мы просто не ожидали. Такой высокий результат позволил компенсировать слабую оценку по иностранному. Теперь ждем поступления. С удовольствием рекомендуем Юлию Сергеевну в качестве преподавателя русского языка.

Оценка 5+

Дмитрий , Москва

1500 ₽

Плюсы: Лучший репетитор по русскому языку Минусы: нет Описание: Решение о том, чтобы начать уроки с репетитором по русскому языку пришло 15.05.2017, когда до ЕГЭ по русскому языку оставалось меньше месяца (экзамен был назначен на 09.06.2017). Для поступления в ВУЗ нужны были высокие баллы по…

математике, информатике и русскому языку, по которому в конце апреля 2017 на пробном экзамене в школе Роман набрал всего лишь 65 баллов. Информатика для сына вообще не была проблемой (по ней на ЕГЭ Рома без репетиторов и даже доп. занятий в школе набрал 97 баллов). Математика была под вопросом только из-за геометрии и знакомые нам посоветовали репетитора, который после 10 занятий так и не смог усилить знания Романа по этой дисциплине (на ЕГЭ по математике Рома набрал только 84 балла – задачу по геометрии он не решил). Оставалась вся надежда на русский язык, но никаких знакомых репетиторов по русскому у нас не было. Тогда я зашел на сайт repetitors.info и стал выбирать преподавателя по территориальной близости к нашему дому)м. Улица 1905 года), а также оценкам и отзывам на сайте. Выбор пал на Ермакову Ирину Сергеевну (она подходила по всем вышеперечисленным параметрам, а также у неё была на сайте приятная фотография). Помимо прочего для нашей семьи было проблемой психологически настроить Рому на экзамен, так как сын выглядел абсолютно разбитым и потерянным. С первого же занятия Ирина Сергеевна смогла зарядить Романа энергией и уверенностью, что у него все получится, поэтому только за психологический настрой Ирине Сергеевне хочу высказать свою огромную благодарность! Сами занятия по русскому, а их было в общей сложности порядка семи, помогли Роману разобраться в своих прежних ошибках на тестовом экзамене в школе и научиться грамотно писать сочинение на любую попавшуюся тему. 09.06.2017 Рома написал ЕГЭ по русскому языку, но результаты экзамена стали известны лишь 22.06.2017, когда нам позвонили из школы и сообщили, что Рома набрал 96 баллов! У нас реально текли слёзы от счастья! Ирина Сергеевна совершила Чудо, увеличив в нужный момент балл за тестовый экзамен в школе с 65 до 96 на настоящем ЕГЭ. Есть преподаватели, которые отлично знают материал, но не могут донести его до ученика, а Ирина Сергеевна Ермакова – один из немногих преподавателей, которая не только отлично знает свой предмет, но и блестяще может подготовить, а также психологически настроить к экзамену ученика, использовав его КПД на все 100%!

Оценка 5+

Артём Галицын , м. Улица 1905 года

Услуги заказа: Русский язык. ЕГЭ по русскому языку.

2500 ₽

Павел Борисович – очень хороший преподаватель русского языка, он настоящий репетитор по русскому языку! Павел Борисович хорошо образован, прекрасно находит подход к ребенку. Я вижу, что ребенок по-другому начал относиться к учебе, ждет репетитора, выполняет задания. Никаких проблем нет в сотрудничестве с репетитором.

Оценка 5+

Светлана , м. Речной вокзал

Услуги заказа: Русский язык. ОГЭ.

1500 ₽

Мой отзыв о замечательном человеке и педагоге, Жанне Саидовне. Человеке, который всегда встречает ребенка с улыбкой и позитивным настроем, верит в успех каждого своего ученика. Педагоге, который обладает отличными знаниями и готов делиться ими со своими учениками. В лицее 1511, в котором учился…

сын, традиционно непростая ситуация с преподавателями русского языка. За три года обучения у нас сменилось три учителя русского языка, каждый последующий был хуже предыдущего. Желание заниматься у ребят пропало еще в 9 классе. На уроках, которые ставили парами, они попросту спали. Поэтому перед Жанной Саидовной стояла не простая задача, за год ей надо было не только подготовить Александра к успешной сдаче ЕГЭ, но и помочь ему поверить в себя, вернуть интерес к русскому языку и литературе. Благодаря таланту и упорству Жанны Саидовны на ЭГЕ по русскому языку сын набрал 93 балла. Нашей радости и благодарности нет предела! Спасибо, Жанна Саидовна!

Оценка 5+

Светлана , м. Домодедовская, Орехово

Услуги заказа: Литература. Русский язык. ЕГЭ по русскому языку.

3000 ₽

Качество образования во многих школах оставляет желать лучшего. Основная работа, которую выполняют преподаватели на уроках русского языка – это сухая выкладка информации и плановые контрольные проверки знаний. У учеников отсутствует интерес к предмету, отсюда и плохое усвоение материала.

Работа репетитора по русскому языку

Хороший репетитор по русскому языку должен быть не просто преподавателем гуманитарной науки. Большое значение имеет методика преподавания, гибкость и тактичность специалиста, а также умение найти общий язык с учеником.

Подготовка к экзаменам

Многие начинают поиски репетитора по русскому языку накануне сдачи ГИА или ЕГЭ. Следует понимать, что за 2—3 недели возможно разобрать только ключевые вопросы. Для повторения школьного курса грамматики, подготовки к сочинению и отработки стилистики речи требуется от 4 до 8 месяцев.
Регулярные занятия дают хорошую базу для сдачи выпускных и вступительных экзаменов. Уверенность учащегося в своих знаниях – это 50% успеха при поступлении.

Будущие медалисты

Для победителей школьных олимпиад и обладателей золотых медалей ряд ВУЗов Москвы предлагает упрощенную схему поступления (собеседование, тестирование или сочинение).
Часто ученики, которые хорошо учились все 9 лет, последние 1—2 года недостаточно внимания уделяют изучению материала и имеют ряд досадных недоработок по грамматике русского языка. Для базовой подготовки к вступительным экзаменам школьнику необходимо найти грамотного специалиста, желательно с опытом работы в ВУЗах.

Где найти репетитора по русскому языку в Москве

Информационный портал Zoon предлагает координаты квалифицированных репетиторов по русскому языку. У нас вы найдете анкеты кандидатов педагогических наук, профессоров, преподавателей ВУЗов и средних школ. Сделать правильный выбор помогут рейтинг специалистов, отзывы учащихся и стоимость услуг кандидатов.

Предварительная работа до старта обучения

Как и почему вы добьетесь высокого результата?

Если вы сейчас учитесь в 10 или 11 классе, то наверняка у вас возникает вопрос: почему за 32 занятия на курсах вы сможете получить более 80 баллов ЕГЭ, если это не удалось сделать в школе за 3 года (за более чем 150 часов изучения предмета)?

Все дело в том, что результат по предмету в большей степени зависит от желания учиться и выполнять домашние задания. Несмотря на то, что все про это знают, никто не работает над желанием учиться, в частности над мотивацией к выполнению домашнего задания.

Мы проводим предварительные мероприятия для школьников 8-11 классов, чтобы задать серьезный настрой и сформировать позитивное отношение к учебе.

Определение начального уровня в формате экзамена

Невозможно двигаться куда-то, не определив начальное положение. От итога на входном тестировании зависит предстоящий объем работ.

Постановка цели на учебный год. Мы не готовим к ЕГЭ, мы готовим к ЕГЭ на определенный балл. Это означает, что план и интенсивность подготовки зависит от ваших целей. Нагрузка в случае, если цель — 70 баллов, сильно отличается от нагрузки в случае, когда цель — 90 баллов.

Мы создали лучший видео-курс подготовки к ЕГЭ и ОГЭ.

Работа над распределением времени.

Самая большая ошибка учеников заключается в том, что они неправильно распределяют свое рабочее время, отдых, просмотр соц. сетей или ютуба. Безусловно, мы не будем требовать отказаться от привычных вещей, например, соц. сетей. Мы просто расскажем, как правильно их использовать, чтобы не уставать, чтобы оставались силы и время на учебу, как не лениться и не откладывать все на потом.

Работа над концентрацией.

Есть несколько очень простых способов намного эффективнее учиться или работать, которыми мы поделимся с учениками. Например, один из них — «метод помидора», суть которого в том, что ученик занимается одной задачей и не отвлекается на другие дела ни при каких условиях в течение 25 минут. Это несложно, но приносит большие результаты.

Никаких лекций и максимальный упор на результат в баллах!

У нашего центра есть 8 ключевых правил, которые позволяют делать уроки намного эффективнее даже индивидуальных занятий.

Распределение учеников на группы по уровню знаний

Разбиение на группы по уровню начальной подготовки делает занятия такими же эффективными, как индивидуальные уроки с репетитором. Без такого распределения занятия в группах могут быть иметь низкую эффективность. Для того, чтобы добиться высоких показателей в баллах, мы обычно разделяем школьников на 3 категории:

Группы начального уровня (

В таких группах сначала изучаются темы 5-9 классов для формирования базы знаний. Только после этого начинается целенаправленная подготовка к ЕГЭ и ОГЭ. Цель – 65+ баллов

Группы среднего уровня (35-65 баллов ЕГЭ)

Основная задача преподавателя – выявить слабые места ученика. После этого нужно повторить теорию предыдущих классов. Только после этого можно приступать к подробному разбору части 1 и 2 заданий ЕГЭ или ОГЭ. Цель – 85+ баллов

Группы сильного уровня (65+ баллов ЕГЭ)

В группах этого уровня ученики хорошо знают материал школьной программы, поэтому большая часть времени уделяется разбору сложных задач и части 2. Цель– 95+ баллов

Цель курса

Что самое важное при подготовке учеников на курсах? На этот вопрос можно услышать много различных ответов:
— Занятия должны быть интересными
— Все темы должны быть пройдены
— Уроки должны нравиться ученикам
— Материал должен быть рассказан просто и понятно

Все эти ответы, строго говоря, неверные, так как важно по итогу только одно – результат на ближайшем экзамене. Мы можем добиться максимально высокого результата, используя один из перечисленных выше пунктов или все сразу – неважно. Главное, чтобы мы выбрали самый короткий путь. Баллы на экзамене для нас превыше всего. Поэтому программа, формат общения, методическое сопровождение — все направлено исключительно на результат. Только так удается делать прорыв в 40-50 баллов.

Цель урока

Но невозможно подготовиться к такому экзамену за один рывок. Мы проходим определенную тему на занятии, но результат урока выражается только в умении решать конкретные задания из экзамена. То есть каждый урок вы научитесь решать определенные задачи из ЕГЭ. Цель урока записывается в правом верхнем углу доски. Это позволяет всем ученикам знать, чему они научатся по итогу занятия.

При работе по данной схеме прогресс будет заметен после каждого урока!

Работа над темой до тех пор, пока все ученики не научатся решать задание без ошибок.

Наверное, самая грубая ошибка многих репетиторов и курсов – идти по программе и не обращать особого внимания на успеваемость группы или конкретного ученика. Но данная схема проигрышная, ведь если ученик теоретически может потерять баллы в теме, то он их потеряет. Нет задачи пройти всю программу! Есть задача получить максимальный балл. Примером в пользу этого рассуждения служит школа. В школе проходятся все темы, но могут ли ученики даже профильного класса решить любую задачу из ЕГЭ? А не могут только из-за пробелов в знаниях и неумения решать задачи определенного формата. Это пропуски мы и будем полностью закрывать.

Принцип высоких ожиданий в отношении учеников начального уровня.

Всегда самыми сложными были ученики, которым по какой-то причине не удается быстро прогрессировать в предмете. Идея работы с такими школьниками в том, чтобы добиваться ПОЛНОСТЬЮ правильных ответов, в том числе и на сложные вопросы, требующие развернутого рассуждения. В любом случае, мы всегда добиваемся на 100% верного ответа безо всяких поблажек и скидок на слабый уровень владения предметом.

Никаких лекций! Формат постоянного общения, вопросов или рассуждений.

Если преподаватель читает лекцию, то очень легко отвлечься на свои проблемы и дела. Наш принцип работы подразумевает общение с учениками. В случае, если тема новая, то это:
— Либо серия простых вопросов к каждому ученику на знание программы школьного курса.
— Либо просьба повторять за преподавателем только что пройденный материал.
Для пройденной темы используется вопрос-ответ в случайном порядке всех учеников группы. Случайный порядок не дает возможности угадать, кто будет следующим, поэтому вся группа сосредоточена и готова отвечать на вопросы.

Смена темпа урока каждые 15 минут

Школьникам очень тяжело концентрироваться долго над одной задачей. Поэтому каждые 15 минут меняется формат занятия (темп урока). Пример урока:
— Приветствие, обсуждение общих тем (за 5 минут до урока)
— Обсуждение предыдущего ДЗ
— Вопросы по ДЗ
— Тест в начале урока формата ЕСТ (Единая система тестирований) на проверку знаний по предыдущим темам
— Обсуждение теста
— Обсуждение цели урока, заданий ЕГЭ по текущей теме
— Прохождение новой темы в формате вопросов и обсуждений
— Выполнение заданий по новой теме в письменной форме
— Выполнение заданий в устной форме
— Креативная часть урока на усмотрение учителя (10 минут)
— Закрепление новой темы
— Тест на проверку цели урока
— Новое домашнее задание

Программа курса учитывает все изменения в ЕГЭ 2020 года и одобрена департаментом образования.

Ежегодное обновление программы курса

Мы корректируем программу согласно проекту ФИПИ в августе и официальным изменениям в демо-варианте в ЕГЭ и ОГЭ для 2019 года в сентябре.

Программа курса одобрена департаментом образования

Блок практики после каждой пройденной подтемы в формате экзамена

Тема считается пройденной не когда ученики ее «знают» или могут рассказать, а когда решают все задания из экзамена на данную тему. Только после успешного решения ВСЕМИ учениками данного блока задач из ЕГЭ группа переходит к новой теме. Так за курс решаются все задачи из экзамена.

Объемные домашние задания

Самый сильный рычаг, позволяющий сделать сверхрезультат, – домашнее задание, выполненное на 100%. В классе проходится вся необходимая теория и прорешиваются номера из экзамена. На дом дается материал для закрепления. Средний объем д/з – 30-40 заданий из первой части ЕГЭ. Выполнение задания занимает 2-3 часа. Когда ученик полностью выполняет все 40 задач без ошибок, материал считается пройденным. Если ученик не выполнил это, то мы делаем вывод, что возможны ошибки на экзамене. Задача преподавателей центра Годограф – добиваться полного выполнения д/з. В этом случае прорыв будет быстрым и гарантированным.

Циклическое повторение материала в течение всего курса

Никто не может точно посчитать, сколько баллов теряют ученики из-за того, что просто не помнят, как выполнять то или иное задание. Система циклических повторений заключается в том, что каждое четвертое занятие проводится тест на повторение давно пройденного материала. В апреле и мае мы на каждом уроке уделяем время повторению. Таким образом мы постепенно наращиваем скорость выполнения работы и тренируем умение не ошибаться в заданиях.

Работа над формальными моментами экзамена

Мы учим не только предмету, но и тому, как этот предмет сдавать: какие уловки есть в вопросах, как нужно читать задания, как проверять ответы, как заполнять бланки и т.д.

Мы благодарны за то, что вы внимательно изучаете наш сайт, поэтому хотим сделать вам подарок:
— Как не потерять баллы на ЕГЭ
— Как не потерять баллы на ОГЭ
Просто скачайте документы.

Цитология солидных тканей – Советы по предотвращению использования образцов низкого качества

Авторы: клинические патологоанатомы VDL (Дженнифер Томас, Майкл Скотт, Джулия Стикл, Шерил Свенсон, Синтия Люсиди)

Введение

Массы или другие поражения идентифицируются с помощью физического осмотра или диагностической визуализации. Хотя эти методы предоставляют информацию о размере, форме, консистенции и внешнем виде поражения, для окончательного диагноза часто требуется дополнительное тестирование.Цитология — это неинвазивный инструмент сбора клеток для микроскопического исследования, который помогает поставить диагноз, выбрать соответствующий курс лечения или предоставить прогностическую информацию. Риски минимальны и включают кровотечение или распространение инфекции или опухолевых клеток.

Хорошо сделанные цитологические мазки обеспечивают превосходную морфологическую детализацию клеток и организмов, а оценка часто может помочь дифференцировать общие болезненные процессы, такие как воспаление, гиперплазия или доброкачественная неоплазия и злокачественная неоплазия. Для дифференциации определенных типов неоплазии могут потребоваться дополнительные методы, такие как хирургическая биопсия с гистологическим исследованием или иммунофенотипирование.

Сбор образцов

Тонкоигольная биопсия (FNB) обычно используется для сбора диагностических цитологических образцов. Цель состоит в том, чтобы произвести монослой клеток с минимальным разрывом клеток. Если образец плохо распределен, клетки не могут быть адекватно оценены (рис. 1). Важно распределить материал по центру предметных стекол, поскольку материал вдоль концов предметных стекол нельзя оценить при большем увеличении, поскольку в этих местах держатели предметных стекол загораживают линзы микроскопа.

Рисунок 1: Тонкоигольная биопсия лимфатических узлов. A. Препарат не был размазан предметным стеклом, что привело к неадекватно окрашенным клеткам, которые были слишком толстыми, чтобы их можно было хорошо оценить. B. Вертикальное приготовление тыквы (без расстилания). В то время как ограниченные области достаточно тонкие для оценки клеток, этот тип подготовки часто дает большие области, которые слишком толстые для оптимальной оценки. C. Горизонтальные заготовки тыквы с разбрасыванием обеспечивают максимальную площадь для оптимальной оценки.

Образцы кожных или подкожных поражений обычно можно получить только с помощью физического сдерживания.Седация или анестезия могут потребоваться для сбора образцов из тканей полостей тела или капризных пациентов. Пальпация поверхностных поражений помогает определить особенности поражения и направить процесс сбора.

Сбор образцов из нескольких разных областей оправдан, если поражение большое или имеет области с переменными характеристиками (например, плотность при пальпации, ультразвуковые характеристики). Слайды с разных сайтов должны быть идентифицированы (например, сайт 1, сайт 2). Одно поражение может иметь смешанные области воспаления, некроза, неоплазии или клеток нормальной ткани.Если поражение содержит заполненный жидкостью центр, рекомендуется сбор как из жидкости, так и из окружающих солидных областей; Только исследование жидкости редко выявляет природу окружающего образования.

Для FNB требуется минимальное оборудование: игла (обычно от 20 до 22 размера), шприц (обычно от 6 до 12 мл) и чистые предметные стекла. Иглы большего диаметра, как правило, дают больше крови или толстые ядра ткани, которые не могут быть адекватно распределены, но иногда могут потребоваться при плохо расслаивающихся поражениях.

Можно использовать методы без аспирации и аспирации. Без аспирации Сбор помогает свести к минимуму заражение крови препаратами; область, из которой должен быть взят образец, иммобилизуют, и иглу (без прикрепленного шприца) быстро перемещают резкими режущими движениями вперед, стараясь не выйти за пределы интересующей ткани. Перенаправьте иглу и повторите процесс 1–2 раза, чтобы повысить вероятность сбора репрезентативной пробы; если масса достаточно велика, повторите процесс в другом месте с новой иглой.Удалите иглу из ткани и вытолкните материал на слайды для распространения, как описано ниже.

Метод аспирации можно использовать, если метод без аспирации дает плохо клеточные препараты; поместите иглу, прикрепленную к шприцу, в ткань и слегка оттяните поршень, чтобы применить мягкое отрицательное давление. Продолжайте, как и в технике без аспирации, повторяя режущие движения вперед. Избегайте чрезмерного отсасывания, не оставляйте иглу на одном месте и не выполняйте многократную аспирацию, так как эти подходы обычно вызывают кровотечение, которое разбавляет образец, что затрудняет оценку.Сбросьте отрицательное давление перед изменением направления иглы. Не выходите из массы при приложении отрицательного давления, иначе материал может быть аспирирован и потерян в шприце. При любом методе диагностический материал часто будет присутствовать в ступице иглы и не будет виден.

Подготовка слайдов

Сразу после извлечения иглы из ткани подсоедините шприц, наполненный воздухом, и быстро выдавите содержимое иглы на предметное стекло, нажав на поршень. Образец может сгуститься в игле, если этот шаг будет отложен.

Прикоснитесь кончиком иглы к предметному стеклу срезом вниз, чтобы вытолкнуть материал одной каплей. Распыление на расстоянии обычно приводит к образованию мелких капель, которые высыхают до того, как образец может быть распределен, что приводит к образованию толстых скоплений клеток, которые невозможно хорошо оценить.

Поместите материал в середине 2/3 предметного стекла ближе к матовому краю. Быстро, но осторожно распределите каплю материала, используя технику клина мазка крови (если она очень жидкая) или технику мягкого сдавливания (рис. 2).

Для методики горизонтального сдавливания аккуратно поместите чистое предметное стекло поверх предметного стекла с образцом (только под действием силы тяжести). Потяните верхний слайд вдоль нижнего слайда непрерывным движением, прилагая минимальное усилие для распределения материала.

Рисунок 2: Горизонтальный сквош с техникой разбрасывания. Сразу после выдавливания небольшой капли собранного материала на предметное стекло (А) материал распределяется под действием силы тяжести с помощью перпендикулярного предметного стекла (В). Как только материал растекается под распределителем (C), его осторожно перемещают горизонтально, формируя мазок (D).В одном из вариантов того, что показано, поддерживать равномерный контакт предметных стекол во время размазывания можно, удерживая направляющий предмет ближе к его центру так, чтобы указательный и большой пальцы правой руки проходили по краю нижнего предметного стекла.

Аккуратно пометьте предметные стекла карандашом с информацией о пациенте и тканях, включая участки, если собрано несколько областей поражения. Матовые слайды облегчают маркировку. Если вы используете наклейки или ленту для маркировки предметных стекол для отправки в VDL, пометьте предметное стекло на противоположной стороне образца, чтобы оно не мешало работе нашего автоматического красителя.

Доставка и окрашивание

После приготовления мазки следует высушить на воздухе, защитить (например, от мух, царапин, пыли) в держателе для предметных стекол и хранить при комнатной температуре до окрашивания. Тепловая фиксация почти никогда не рекомендуется, потому что она разрушает клетки. Влажная фиксация (например, спиртом) не требуется для красителей, обычно используемых в ветеринарии.

При подаче образцов в VDL предоставьте неокрашенные мазки вместе с любыми мазками, окрашенными в практике.Полезно окрасить и просмотреть хотя бы один мазок, чтобы убедиться, что имеется достаточно неповрежденных клеток для оценки. Если мазки не являются диагностическими, возьмите новый образец либо из другой области поражения, либо с использованием другого метода. Если вы отправляете окрашенные мазки, которые были оценены с использованием иммерсионного масла, отправьте их в отдельный держатель, чтобы предотвратить просачивание масла на неокрашенные мазки.

Во избежание поломки при транспортировке не отправляйте предметные стекла в плоских картонных контейнерах, если только они не помещены в жесткую коробку большего размера.Для транспортировки предпочтительны твердые пластиковые или пенопластовые контейнеры.

При отправке цитологических мазков с тканью, фиксированной формалином, защитите неокрашенные мазки от паров формалина, поместив мазки и ткань в отдельные пластиковые пакеты с застежкой-молнией; включите абсорбирующий материал с образцом формалина, чтобы локализовать любые разливы. Лучше всего упаковывать образцы в двойные мешки. Воздействие паров формалина может привести к плохому окрашиванию образца, что помешает адекватной оценке клеток и точной цитологической интерпретации.

Чтобы получить больше информации

Посетите раздел клинической патологии на нашем веб-сайте по адресу animalhealth.msu.edu, чтобы узнать больше о химии, цитологии, гематологии и гемостазе, а также о подготовке цитологических образцов для иммуноцитохимии. Найдите все тесты, которые мы предлагаем, включая время выполнения, протокол сбора, требования к образцам и процедуры подачи, в каталоге доступных тестов MSU VDL.

Пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам по телефону 517.355.1774, если у вас есть какие-либо вопросы или опасения по поводу тестирования на клиническую патологию.Мы хотели бы помочь вам в управлении образцами до того, как они будут собраны.

Лаборатория гистопатологии и цитологии

Лаборатории ортопедической биомеханики

Гистопатология лаборатория цитологии Лаборатория гистологии и цитологии оборудована для подготовки ткани для микроскопического исследования. Твердые ткани животных и человека (кости, связки, хрящи, сухожилия) обрабатываются рутинно. Работа по контракту на ортопедические, неврологические и отдельные судебно-медицинские образцы часто перевозятся вне. Вот неполный список оборудования, доступного в этой лаборатории: 1. Тиссью-Тек ВИП Тканевый процессор Сохраняет до десяти программ обработки Возможности памяти включают: время станции периоды, температура в камере, потребность в вакууме/давлении и задержка операции Все декальцинированные ткани проходят через четырнадцать станций от формалина до окончательной парафиновой инфильтрации Система консоли для имплантации тканей подключена, обеспечение эффективной заливки образцов тканей в парафин; содержит диспенсерную, термальную и криоконсоли   2. ISOMET низкоскоростной Костяная пила Отрубы недекальцинированной кости, некоторые из которых содержат биоматериал имплантаты в пределах Предназначен для выполнения высокоточных операций с низкой деформацией. секционирование материалов Образцы удерживаются в подходящем патроне и вводятся через силу тяжести известного веса на вращающуюся алмазную пластину лезвие   3.Вибратом Полуавтоматический Система секционирования Разрезает плоть или фиксированные образцы без заливки или замораживание с помощью вибрирующей лопасти Амплитуда вибрации, скорость подачи отвала, и толщина сечения выбирается в процессе эксплуатации Используется для тканей; ганглии, спинной мозг, сохранение ферментативной активности и др. Ортопедический Лаборатории биомеханики Вниманию: Др.Роджер Хаут Зал Восточной платы Fee Road, комната A-407 Ист-Лансинг, Мичиган 48824 телефон:(517) 355-0320 электронная почта: [email protected] © 15.02.2012 по МГУ ОБЛ. Все права защищены.

Границы | Галектин-9 регулирует подагрическое воспаление, индуцированное кристаллами урата натрия, посредством модуляции отношения Treg/Th27

Введение

Воспаление в широком смысле определяется как реакция организма на гомеостатический дисбаланс, вызванный такими состояниями, как инфекция, повреждение тканей и вредные стимулы, включая воздействие химическим веществам или радиации (1).Одним из предварительных шагов в начале воспаления является привлечение лейкоцитов к месту повреждения или инфекции (2). Рекрутирование лейкоцитов представляет собой очень сложный процесс, состоящий из нескольких четко определенных стадий, которые включают захват, скатывание, адгезию/активацию, внутрипросветное ползание и парацеллюлярную или трансцеллюлярную трансмиграцию (3). Инфильтрация клеток врожденного иммунитета вызывает начальный воспалительный ответ, за которым следуют лимфоциты (3, 4). Появляющиеся данные подтверждают точку зрения, что при различных воспалительных реакциях, таких как подагрический артрит, системный дисбаланс Th27/Treg вызывает их инфильтрацию 90–151 in situ 90–153 и связанное с этим повреждение тканей-мишеней (5, 6).Tregs представляют собой небольшое подмножество Т-клеток, которые контролируют как врожденные, так и адаптивные иммунные реакции и имеют решающее значение для поддержания самотолерантности и гомеостаза (7). Было показано, что Treg ингибирует остеокластогенез за счет секреции иммунодепрессивных цитокинов интерлейкина (IL)-10, трансформирующего фактора роста-β (TGF-β) и уменьшения повреждения костей при подагре (8, 9). Более того, было показано, что повышение уровня Treg предотвращает чрезмерный иммунный ответ, тогда как их потеря связана с основными аутоиммунными заболеваниями (10, 11).Напротив, клетки Th27 представляют собой подмножество Т-клеток CD4 ⁺ , характеризующееся продукцией цитокина IL-17, который играет мощную провоспалительную роль в иммунной системе, усиливая, а не подавляя прогрессирование воспалительного каскада (12). . Действительно, баланс Th27/Treg обеспечивает основу для понимания иммунологических механизмов, которые вызывают и регулируют аутоиммунные и некоторые воспалительные заболевания (13).

Галектины представляют собой семейство белков, связывающих углеводы, которые выполняют ряд физиологических функций, включая регуляцию клеточной миграции, клеточного цикла, пролиферации, апоптоза и передачи сигналов (14).Галектины обнаруживаются как в цитоплазме, так и в ядре, и структурно характеризуются наличием одного или двух консервативных доменов распознавания углеводов длиной ~130 аминокислот (CRD) (15). На сегодняшний день у млекопитающих идентифицировано 15 генов, кодирующих галектины, среди которых 12 идентифицированы у человека. Галектины можно условно разделить на три подтипа: (а) прототипы одиночных CRD-галектинов со способностью образовывать нековалентные гомодимеры (Gal-1, -2, -7, -10, -13, -14) в раствор за счет нековалентного взаимодействия , (b) химерного типа, состоящего из одного CRD на С-конце и n-концевого домена с внутренне неупорядоченной последовательностью (богатой Gly-Pro-Tyr), которая способствует олигомеризации (Gal -3) (16) и (c) тандемные повторы, которые содержат два уникальных мотива CRD на их n- и c-концах, соединенных гибким линкером переменной длины (Gal-4, -8, -9, – 12).

Здесь мы сосредоточимся на Gal-9, который был впервые идентифицирован как новый хемоаттрактант эозинофилов, секретируемый Т-клетками (17). Было показано, что среди его основных ролей в контексте воспаления Gal-9 обладает рядом про- и противовоспалительных функций, зависящих от его экспрессии и клеточной локализации (18). Было показано, что Gal-9 модулирует адаптивный иммунный ответ, стимулируя созревание антигенпрезентирующих клеток (APC), особенно дендритных клеток (19). Это взаимодействие вызывает избирательную продукцию IL-12 дендритными клетками, что способствует секреции цитокинов Th2 CD4 ⁺ Т-клетками (19).Исследование, проведенное Hafler et al., показало, что эта воспалительная активность, наблюдаемая в дендритных клетках, зависит от взаимодействия с рецептором Т-клеточного иммуноглобулина муцин-3 (TIM-3) (20). Далее было высказано предположение, что Gal-9 может играть полезную роль в лечении ряда воспалительных и аутоиммунных заболеваний (21, 22). Было показано, что терапевтическое применение рекомбинантного Gal-9 ингибирует развитие патогенных клеток Th27 и способствует размножению Treg в доклинической модели аутоиммунного артрита (23).

В контексте подагрического воспаления кристаллы MSU способствуют размножению клеток Th27 и родственных им цитокинов. Эту воспалительную реакцию можно ингибировать, воздействуя на IL-17 нейтрализующими антителами, тем самым снижая инфильтрацию лейкоцитов в воспаленную ткань (5). Поскольку ранее было показано, что Gal-9 подавляет образование Th27 (23, 24) и способствует индукции противовоспалительных Treg-клеток (5, 23), мы стремились исследовать действие экзогенного Gal-9 на MSU- подагрическое воспаление в этом текущем исследовании.Чтобы решить эту проблему, мы оценили изменения как в врожденном, так и в адаптивном компартментах (т.е. количество и типы клеток, инфильтрирующих сустав, и тяжесть заболевания) и местную выработку медиаторов в месте воспаления в мышиной модели подагрического артрита.

Материалы и методы.

Реагенты. Среду для клеток 1640 приобретали у Sigma-Aldrich Co.(Милан, Италия). Набор буферов для фиксации и пермеабилизации проточной цитометрии I, набор матриц мышиных цитокинов для профилирования протеома и рекомбинантный мышиный Gal-9 были приобретены у R&D System (Милан, Италия). Буфер FACS и конъюгированные антитела от BioLegend (Лондон, Великобритания). Ficoll-Paque Plus (тест на эндотоксин, ≤ 0,12 EU/мл) был получен от GE Healthcare Bio-Sciences AB (Уппсала, Швеция).

Если не указано иное, все остальные реагенты были произведены компанией BioCell (Милан, Италия).

Животные

Уход за мышами и экспериментальные процедуры проводились в соответствии с международными и национальными законами и политиками.Эксперименты на мышах были разработаны в соответствии с рекомендациями ARRIVE и рекомендациями Европейской директивы 2010/63/ЕС для экспериментов на животных и Базельской декларации, включая концепцию 3R (25, 26). Самцов мышей CD-1 (возраст 10-14 недель, вес 25-30 г) получали из Charles River (Милан, Италия) и содержали в помещении для содержания животных с контролируемой температурой и влажностью, с 12-часовым режимом свет/темнота. цикла, со свободным доступом к воде и стандартному лабораторному рациону. Все процедуры выполняли для уменьшения количества используемых животных (n = 6 на группу).

Приготовление кристаллов MSU

Кристаллы MSU готовили, как описано ранее (27). Вкратце, 800 мг MSU растворяли в 155 мл кипящей воды Milli-Q, содержащей 5 мл NaOH, и доводили pH до 7,2. Раствор постепенно охлаждали путем перемешивания при комнатной температуре и собирали кристаллы после центрифугирования при 3000 об/мин в течение 5 минут при 4°C. Кристаллы дважды промывали 100% этанолом, сушили, автоклавировали (180°С, 2 ч) и взвешивали в стерильных условиях. Кристаллы ресуспендировали в PBS путем обработки ультразвуком и хранили в стерильной среде до использования.Было подтверждено, что кристаллы MSU не содержат эндотоксина с помощью коммерческого набора для анализа лизата limulus polyphemus (<0,01 EU/10 мг).

Модель острого подагрического артрита, индуцированного MSU, и введение лекарственных средств

Острый подагрический артрит индуцировали внутрисуставным (ia) введением кристаллов MSU (200 мкг/20 мкл) в правый большеберцово-тарзальный сустав (лодыжку) мышей под анестезией изофлураном (28). Мыши контрольной (CTRL) группы получали в.а. инъекция стерильного PBS (20 мкл). Об успешном создании модели подагрического артрита судили по явному отеку через 2-3 часа после инъекции MSU (29). Животные из групп, получавших МСУ, получали 1, 3 и 9 мкг (внутрибрюшинно; в 20 мкл) Gal-9 (однократно) через 30 минут после введения кристаллов МСУ. На пике воспаления (18 ч) ткани (коленные суставы) собирали, обрабатывали и хранили (-80°C) для дальнейшего анализа ex vivo .

Оценка совместной оценки и отека

Первая серия экспериментов была проведена для проверки дозозависимого эффекта Gal-9. Суставы мышей оценивали макроскопически с использованием шкалы от 0 до 3, где 0 = отсутствие воспаления, 1 = легкое воспаление, 2 = умеренное воспаление и 3 = сильное воспаление, в 0.25 приращений. При появлении первых признаков отека и покраснения давали 0,25 балла. Одновременно измеряли отек коленного сустава штангенциркулем до и после внутривенного введения. введение кристаллов MSU или кристаллов MSU плюс Gal-9 в указанные моменты времени (4, 18, 24 и 48 ч). Отек коленного сустава определяли путем вычитания (для каждой мыши) базального значения лапы из значения, измеренного в каждый момент времени и выраженного как Δ мм.

Выделение и характеристика клеток, инфильтрирующих суставы

В конечной точке эксперимента (18 часов) лодыжки мышей расщепляли гиалуронидазой (2.4 мг/мл) и коллагеназы (1 мг/мл) в RPMI 1640 плюс 10% FBS в течение 1 часа при 37°C, как описано ранее (30). Клетки, собранные после расщепления, фильтровали через нейлоновый сетчатый фильтр с размером пор 70 мкм (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) и промывали RPMI 1640 плюс 10% FBS. Затем клетки промывали в PBS для общего подсчета клеток перед проточным цитометрическим анализом.

Массив белков цитокинов и хемокинов

Голеностопные суставы гомогенизировали в охлаждаемом льдом трис-HCl-буфере (20 мМ, pH 7.4), содержащий 1 мМ EDTA, 1 мМ EGTA, 1 мМ PMSF, 1 мМ ортованадата натрия и одну таблетку ингибитора протеазы на 50 мл буфера. Концентрацию белка определяли с помощью набора для анализа белка BioRad (BioRad, Италия). В соответствии с инструкциями производителя, равные объемы (1,5 мл) объединенных гомогенатов коленного сустава для всех экспериментальных условий затем инкубировали с предварительно покрытыми мембранами массива протеомных профилировщиков. Белки определяли с помощью набора для детекции улучшенной хемилюминесценции и программного обеспечения GE Healthcare Image Quant 400 (GE Healthcare, Италия), а затем количественно определяли с помощью программного обеспечения денситометра для визуализации GS 800 (Bio-Rad, Италия).

In Vitro Дифференциация Treg

Кровь была собрана у здоровых доноров с письменного и устного информированного согласия и одобрения Местного комитета по этике Университета Бирмингема (ERN_18-0382). Мононуклеарные клетки периферической крови человека (РВМС) выделяли, как описано ранее (31), а наивные Т-клетки CD4 ⁺ выделяли с помощью негативной селекции с использованием коммерческого набора (Miltenyi, Biotec, Германия). Вкратце, РВМС инкубировали с коктейлем антител к биотину в течение 5 минут при 4°C для связывания с нежелательными не-Т-клетками, после чего инкубировали с микрогранулами анти-CD4 ⁺ в течение 10 минут при 4°C.Клетки добавляли в разделительные колонки MACS LS и собирали поток, содержащий обогащенную CD4 ⁺ Т-клеточную фракцию.

В первый день Т-клетки CD4 ⁺ ресуспендировали в 36 мл RPMI, содержащей пенициллин (50 ЕД/мл), стрептомицин (50 мкг/м), L-глутамин (2 мМ) (Sigma), 5% FBS, и разделяли на 6-луночные планшеты (6 мл/лунку) и оставляли на ночь в 5% CO ₂ при 37°C. 48-луночный планшет покрывали антителами против CD3 (1 мкг/мл, клон OKT3, BioLegend, Великобритания) и инкубировали в течение ночи при 4°C).На второй день Т-клетки CD4 ⁺ переносили в пробирку Falcon объемом 50 мл и центрифугировали при 250 g в течение 10 минут при комнатной температуре. Супернатант удаляли, а клеточный осадок ресуспендировали в концентрации 8×10 ⁵ клеток/мл в среде для размножения Т-клеток ImmunoCult™-XF (StemCell Technologies, Оксфорд, Великобритания). Планшеты, покрытые антителом против CD3, промывали 150 мкл PBS без Ca ²⁺ и Mg ²⁺ .

Отдельные планшеты готовили, сначала добавляя либо 50 мкл пустой среды для размножения Т-клеток, либо 50 мкл 4-кратной концентрации смеси для поляризации Т-клеток (конечная концентрация: анти-CD28 1 мкг/мл (клон CD28. 2, BioLegend), TGF-β 1 нг/мл (R&D), IL-2 20 ЕД/мл (Roche). Затем добавляли 50 мкл пустой среды для размножения Т-клеток или 50 мкл Gal-9 с последующим добавлением Т-клеток (8×10 ⁴ клеток/лунку). Затем клеточные суспензии перемешивали, переносили на планшеты, покрытые CD3, и инкубировали в течение 5 дней при 37°C в 5% CO ₂ . Размножение и чистоту Treg определяли количественно с помощью проточной цитометрии. Вкратце, клетки промывали буфером FACS (PBS, содержащим 1% BSA и 0,02% NaN ₂ ) и окрашивали непосредственно следующими конъюгированными антителами (все от BioLegend, Лондон, Великобритания): CD3 (1:100, клон UCHT-1). ), CD4, (1:100, клон SK3), CD25 (1:50, клон AF-700) в течение 20 мин при 4°С.После промывки клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали внутриклеточно антителом FOXP-3 (1:50: клон 206D). Анализировали не менее 1×10 ⁴ клеток на образец, и определение положительных и отрицательных популяций проводили на основе окрашивания, полученного родственными изотипами IgG. После окрашивания образцы ресуспендировали в PBS без Ca ²⁺ и Mg ²⁺ и анализировали на проточном цитометре CyAn (Beckmann Coulter, США). Данные проточной цитометрии анализировали с помощью Flowjo.

Gal-9, связывающий человеческий CD4

⁺ Т-клетки

CD4 ⁺ Т-клетки инкубировали с рекомбинантным Gal-9 (10 нМ) или без него в течение 20 минут при комнатной температуре. Клетки дважды промывали и инкубировали с козьим IgG против человеческого Gal-9 (1:200, R&D Systems) и окрашивали следующими конъюгированными антителами (BioLegend, Лондон, Великобритания): CD4 (1:50, клон RPAT4), осел. антикозий IgG (1:200, поликлональный) в течение 20 мин при 4°С. После отмывки клетки фиксировали в 1% PFA для хранения перед анализом на проточном цитометре CyAn (Beckmann Coulter, США).

IL-10 человека ELISA

Набор IL-10 Duo (R&D Systems, Абингдон, Великобритания) использовали для измерения уровней IL-10 в супернатантах клеточных культур в соответствии с рекомендациями производителя. Вкратце, 96-луночные планшеты покрывали человеческим захватывающим антителом к ​​IL-10 и инкубировали при комнатной температуре в течение ночи. Планшеты промывали 3 раза промывочным буфером для удаления несвязавшихся антител и блокировали на 1 ч при комнатной температуре. 100 мкл образцов или стандартов (разбавленных разбавителем для анализа) добавляли в планшет и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре.Планшеты промывали три раза перед добавлением 100 мкл человеческого антитела для обнаружения IL-10 в течение 1 часа при комнатной температуре. Планшеты промывали три раза перед добавлением стрептавидина-HRP в течение 20 минут при комнатной температуре. Планшеты трижды промывали перед добавлением 100 мкл субстрата и оставляли на 20 мин в защищенном от света месте. Наконец, добавляли 50 мкл стоп-раствора (2M H ₂ SO ₄ ). Считыватель микропланшетов использовали для измерения поглощения при 450 нм.

Проточная цитометрия

Клетки из расщепленных суставов промывали буфером FACS (PBS, содержащим 1% BSA и 0. 02% NaN ₂ ) и непосредственно окрашены следующими конъюгированными антителами (все от BioLegend, Лондон, Великобритания): CD3 (1:200, клон 17А2), CD4 (1:200, клон GK1.5), CD25 (1:200, клон 17А2). :200; клон 3С7) в течение 60 мин при 4°С. После промывки клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали внутриклеточно с помощью IL-17A (1:200; клон TC11-18h20.1) и антитела FOXP-3 (1:200: клон MF-14). Кроме того, для характеристики суставной инфильтрации клетки окрашивали на CD45 (1:100; клон 30-F11), Ly6-C (1:100; клон HK1.4), Ly6-G (1:100; клон 1А8), CD11b (1:100; клон М1/70), CD115 (1:100; клон AFS98) перед анализом. Th27, Treg, нейтрофилы и патрулирующие/воспалительные моноциты определяли в соответствии с ранее описанной процедурой проточной цитометрии (32). По крайней мере, 1×10 ⁴ клеток анализировали на образец, и определение положительных и отрицательных популяций проводили на основе окрашивания, полученного родственными изотипами IgG (данные не показаны). Проточную цитометрию выполняли на проточном цитометре BriCyte E6 (Mindray Bio-Medical Electronics, Наньшань, Китай) с использованием программного обеспечения MRFlow и FlowJo (28).Абсолютное количество положительных клеток на нейтрофилы (CD45 ⁺ /Ly6-G ^hi /Ly6-C ^hi ), моноциты (воспалительные: CD11b ⁺ /CD115 ⁺ /Ly6-C ^{hi : CD11b + / CD115 + / Ly6-C lo ), Th27 (CD4 + / IL-17 + ) и Treg (гейтированный для CD4 + / и затем для 1 CD25 FOXP3 + ) рассчитывали, пересчитывая % положительных клеток (для указанного окрашивания) на общее количество лейкоцитов и CD4 + положительных клеток.}

Данные и статистический анализ

Все данные представлены в виде средних значений ± стандартная ошибка среднего и были проанализированы с использованием Т-критерия Стьюдента или одно- или двустороннего дисперсионного анализа с последующим применением теста Бонферрони или Тьюки для множественных сравнений. Для анализа использовалось программное обеспечение GraphPad Prism 8.0 (Сан-Диего, Калифорния, США). Различия между средними значениями считались статистически значимыми при достижении P ≤ 0,05. Размер выборки был выбран для обеспечения альфа 0,05 и мощности 0,8. Массу животных использовали для рандомизации и распределения по группам, чтобы уменьшить нежелательные источники вариаций путем нормализации данных.Ни одно животное и родственные образцы ex vivo не были исключены из анализа. Исследование in vivo было проведено для создания групп равного размера (n = 6 независимых значений) с использованием рандомизации и слепого анализа.

Результаты

Gal-9 ослабляет тяжесть подагрического воспаления, вызванного MSU

Для изучения потенциального противовоспалительного эффекта Gal-9 мы использовали модель мыши, в которой кристаллы MSU вводили в коленные суставы, чтобы имитировать этиологическая причина подагрического воспаления у человека (33).Инъекция кристаллов MSU (200 мкг/20 мкл) вызывала интенсивную и сильную оценку воспаления суставов (пик через 18 часов), которая дозозависимо ослаблялась введением Gal-9 (1-9 мкг/20 мкл) (дополнительная фигура 1A), с максимальным ингибированием, наблюдаемым при доза 9 мкг/20 мкл (рис. 1А). В дополнение к показателям воспаления суставов мы оценили отек лодыжек и обнаружили, что лечение Gal-9 (9 мкг/20 мкл) значительно уменьшало отек лодыжек между 18 и 24 часами (рис. 1B), что указывает на улучшенный профиль разрешения в присутствии Gal-9.Значительное снижение также наблюдалось через 18 часов при концентрации 3 мкг/20 мкл, однако при более низкой концентрации 1 мкг/20 мкл не наблюдалось заметного влияния на оценку суставов или отек (дополнительная фигура 1). На основании полученных результатов мы выбрали наиболее эффективную дозу Гал-9 (9 мкг/20 мкл) для всех последующих экспериментов.

Рисунок 1. Gal-9 ослабляет индуцированное кристаллами MSU подагрическое воспаление в коленных суставах мышей. Мышам вводили внутрисуставно (в/б) дозу Gal-9 (9 мкг/20 мкл) или носитель (PBS, 20 мкл) через 30 минут после в/б введения.а. стимуляция кристаллами МСУ (200 мкг/20 мкл) правых коленных суставов. (A) Оценка воспаления суставов (0-3 с шагом 0,25) и (B) Воспаление суставов, отек оценивали через 4, 18, 24 и 48 часов после стимула с MSU. Данные (выраженные в виде оценки воспаления суставов и Δ увеличения коленных суставов в мм соответственно) представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для n = 6 мышей в группе. Статистический анализ проводился с помощью одно- или двухфакторного дисперсионного анализа с последующим анализом Бонферрони для множественных сравнений. ^## P ≤ 0,01, ^#### P ≤ 0,0001 vs Контрольная группа; **P ≤ 0,01, ***P ≤ 0,001, ****P ≤ 0,0001 против группы MSU.

Gal-9 Modulates,

In Situ , рекрутирование лейкоцитов

Во время начальных и фаз разрешения подагрического артрита основным признаком патогенеза заболевания является инфильтрация иммунных клеток, в основном нейтрофилов и воспалительных моноцитов на ранних стадиях. фазы (34, 35), за которыми следуют CD4 ⁺ Т-клетки в последней (9, 36).Поэтому мы охарактеризовали фенотип рекрутированных клеток после инъекции MSU и введения Gal-9. Проточную цитометрию использовали для определения популяций нейтрофилов, моноцитов, Th27 и Treg в суспензиях отдельных клеток после переваривания тканей коленного сустава, собранных через 18 часов. Для идентификации субпопуляций лейкоцитов гейтировали тотальные клетки, за которыми следовали одиночные клетки, и CD45 (маркер панлейкоцитов/иммунных клеток) в сочетании с CD11b (миелоидный маркер) и CD4 (вспомогательный белок для взаимодействия антигена МНС класса II/рецептора Т-клеток). ) использовались для идентификации нейтрофилов, моноцитов и Т-клеток.Нейтрофилы были дополнительно охарактеризованы как CD45 ⁺ /Ly6-G ^hi /Ly6-C ^hi (рис. 2A), а моноциты были определены на основе экспрессии Ly6-C и CD115, чтобы различать CD11b ⁺ /CD115 ⁺ . /Ly6-C ^lo , патрулирующие моноциты из CD11b ⁺ /CD115 ⁺ /Ly6-C ^hi воспалительных моноцитов (рис. 2B). В соответствии с нашими предыдущими исследованиями (5), инъекция кристаллов MSU привела к значительному увеличению общего количества лейкоцитов, привлеченных к суставам, по сравнению с CTRL (рис. 2C).Значительное снижение общего количества лейкоцитов наблюдалось у мышей, которым вводили Gal-9, по сравнению с одним только MSU (Фиг. 2C). Более того, у мышей, которым вводили только кристаллы MSU, по сравнению с CTRL, наблюдалось значительное привлечение нейтрофилов (рис. 2D) и воспалительных моноцитов (рис. 2E). В соответствии с общим количеством лейкоцитов лечение Gal-9 значительно снижало уровни нейтрофилов и воспалительных моноцитов по сравнению с мышами, которым вводили только MSU, с точки зрения процентного содержания клеток, а также абсолютных чисел (рисунки 2A, B, D, E).Во всех экспериментальных условиях не было обнаружено существенных различий в доле патрулирующих моноцитов (данные не представлены).

Рисунок 2 Gal-9 модулирует рекрутирование клеток врожденного иммунитета. Для определения in situ субпопуляций нейтрофилов и моноцитов использовали проточную цитометрию. На пике воспалительной реакции (18 ч) расщепляли голеностопные суставы и получали суспензии одиночных клеток. Показана стратегия проточной цитометрии, применяемая для идентификации нейтрофилов (A) и моноцитов (B) после обработки Gal-9. Клетки промывали и окрашивали: CD45, LY6-C, LY6-G, CD11b и CD115/CD45 ⁺ Клетки наносили на график для экспрессии LY6-C и LY6-G для идентификации CD45 ⁺ /LY6-C ^hi /LY6-G ^hi в виде нейтрофилов (A) . Клетки CD11b ⁺ были построены для экспрессии LY6-C и CD115, чтобы отличить CD11b ⁺ /CD115 ⁺ /LY6-C ^lo патрулирующих моноцитов от CD11b ⁺ /CD119Chi 606- ^{/ LY + воспалительные моноциты (B) . (C) Всего инфильтрированных лейкоцитов, (D) нейтрофилов и (E) воспалительных моноцитов количественно определяли в различных экспериментальных условиях. Показаны репрезентативные графики FACS трех независимых экспериментов с аналогичными результатами. Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для n = 6 мышей в группе. Статистический анализ был проведен с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим анализом Бонферрони для множественных сравнений. ## P ≤ 0,01 против Контрольная группа; *P ≤ 0,05, ** P ≤ 0.01 против группы МГУ.}

Чтобы выяснить, были ли потенциальные различия в профилях воспаления/разрешения in situ результатом изменений в соотношении субпопуляций Т-клеток, мы окрашивали гомогенаты коленного сустава на CD3/CD4 (рис. 3A, B) и CD4 для идентификации популяций Th27 и Treg. определяется как CD4 ⁺ / IL-17 ⁺ и CD4 ⁺ /CD25 ⁺ /FOXP-3 ⁺ соответственно (рис. 3A, C–E). У мышей, которым вводили MSU, наблюдалось значительное увеличение общего количества CD4 ⁺ Т-клеток по сравнению с контрольными мышами (рис. 3F).Это увеличение было связано с повышением уровня клеток Th27 и снижением уровня Treg по сравнению с CTRL (рис. 3G, H). В резком контрасте у мышей, получавших Gal-9, наблюдалось значительное снижение клеток Th27 и устойчивые уровни Treg (рис. 3G, H). Мы также проанализировали профиль циркулирующих Th27/Tregs, но не увидели различий между группами после инъекции Gal-9 (данные не показаны).

Рисунок 3 Gal-9 поддерживает локальные уровни Treg. Анализ проточной цитометрии использовали для определения in situ уровней CD4 ⁺ Т-клеток, субпопуляций Th27 и Treg.На пике воспалительной реакции (18 ч) переваривали голеностопные суставы и получали суспензии одиночных клеток. Стратегия проточной цитометрии применялась для определения модуляции CD3/CD4 (A, B) , CD4 ⁺ Т-клеток (A, C) , Th27 (A, C, D) и Treg (A, C) В, Д) после обработки Gal-9. Клетки промывали и окрашивали: CD3, CD4, CD25 и внутриклеточными антителами IL-17A и FOXP-3. Популяции Th27 и Treg определяли как CD4 ⁺ /IL-17 ⁺ (A, C, D) и CD4 ⁺ /CD25 ⁺ /FOXP-3 ⁺ (A, C, D) Е) соответственно. (F) Всего CD4 ⁺ T-клеток, (G) Th27 и (H) Tregs количественно определяли в различных экспериментальных условиях. Показаны репрезентативные графики FACS трех независимых экспериментов с аналогичными результатами. Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для n = 6 мышей в группе. Статистический анализ проводился с помощью одностороннего ANOVA с последующим тестом Бонферрони для множественных сравнений. ^# P ≤ 0,05, ^## P ≤ 0,01 vs Контрольная группа; *Р ≤ 0.05 против группы МГУ.

Лечение Gal-9 снижает местную выработку провоспалительных цитохемокинов

Принимая во внимание важность провоспалительных медиаторов в стимулировании рекрутирования и местной активации иммунных клеток в начале и прогрессировании заболевания (37), мы попытались определить эффект воздействия Gal-9 на местную продукцию цитокинов и хемокинов. Как показано на Фигуре 4, гомогенаты коленного сустава (собранные через 18 часов), полученные от мышей, которым вводили MSU, показали значительное увеличение провоспалительных цитохемокинов по сравнению с группой CTRL (Рисунки 4A, B). Интересно, что после лечения Gal-9 произошло значительное снижение ряда медиаторов (рис. 4C). Согласно клеточному профилю, ранее охарактеризованному с помощью FACS, денситометрический анализ, представленный в виде тепловой карты (рис. 4D), показал, что в группе, получавшей Gal-9, наблюдалась значительная (P ≤ 0,0001) модуляция следующих факторов: хемоаттрактант B-лимфоцитов (BLC), компонент 5a (c5/c5a), растворимая молекула межклеточной адгезии-1 (sICAM-1), IL-1α, IL-1β, IL-1ra, IL-16, хемоаттрактант кератиноцитов (KC), макрофагальный колониестимулирующий фактор (M- CSF), монокин, индуцированный интерфероном-γ (MIG), воспалительным белком макрофагов (MIP)-1α, MIP-1β, MIP-2, IL-1β, фактором-1, полученным из стромальных клеток (SDF-1), TNF-α и триггерный рецептор экспрессируется на миелоидных клетках-1 (TREM-1).В меньшей степени мы также наблюдали модуляцию (P ≤ 0,01) гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF), IL-17 и соединительного эпителия (JE) по сравнению с группой MSU. Незначительный профиль ингибирования (P ≤ 0,05) был обнаружен для IL-7, IL-10, хемоаттрактантного белка-5 моноцитов (MCP-5) и ингибитора металлопептидазы-1 (TIMP-1) (рис. 4D). Основные цитокины и хемокины, участвующие в развитии заболевания (IL-10, IL-17, KC, JE, MIP-1α и TNF-α), были экстраполированы из тепловой карты и представлены графически (рис. 4E).

Рисунок 4 Gal-9 снижает высвобождение цитохемокинов в коленных суставах. Воспалительные жидкости, полученные из гомогенатов коленного сустава через 18 часов, анализировали с использованием массива цитокинов профилировщика протеома для группы (A) CTRL, (B) MSU и (C) MSU + Gal-9. Денситометрический анализ представлен в виде тепловой карты (D) . После этого IL-10, IL-17, KC, JE, MIP-1α и TNF-α были экстраполированы из тепловой карты и представлены графически (E) .Данные (выраженные как INT/мм ² ) представлены как среднее ± SEM. положительных пятен из трех отдельных независимых экспериментов, каждый из которых включал n = 6 мышей в каждой группе. Статистический анализ был выполнен с использованием двустороннего дисперсионного анализа с последующим тестом Бонферрони для множественных сравнений. ^### P ≤ 0,001, ^#### P ≤ 0,0001 vs Контрольная группа; * P ≤ 0,05, ** P ≤ 0,01, **** P ≤ 0,0001 против группы MSU.

Gal-9 способствует дифференциации наивных CD4 T-клеток в направлении фенотипа Treg

Предыдущие отчеты и данные этого исследования подтверждают точку зрения о том, что терапевтическое применение Gal-9 in vivo способствует индукции Treg, которая ослабляет воспаление и способствует разрешению.Поэтому мы провели in vitro анализов с очищенными человеческими наивными CD4 ⁺ Т-клетками, чтобы проверить способность Gal-9 индуцировать дифференцировку Treg. Первоначально с помощью проточной цитометрии мы подтвердили, что экзогенно добавленный Gal-9 связывается с Т-клетками CD4 ⁺ (рис. 5A, B). Более того, мы обнаружили, что только Gal-9 действительно способствует дифференцировке Treg, определяемой как CD4 ⁺ /FoxP3 ⁺ , и что этот эффект зависел от концентрации, при этом 10 нМ гораздо более эффективны (степень аналогична активационному коктейлю) по сравнению с до 2 нМ Gal-9 (рис. 5C, D).Мы также измерили высвобождение IL-10 в супернатантах клеточных культур, функциональное считывание Treg и обнаружили аналогичное значительное увеличение в клетках, обработанных 10 нМ Gal-9, по сравнению с контролем (рис. 5E).

Рисунок 5 Gal-9 индуцирует дифференцировку Treg наивных CD4 ⁺ Т-клеток человека. CD4 ⁺ Т-клетки выделяли из РВМС и инкубировали с 10 нМ Gal-9 перед окрашиванием анти-Gal-9. (A) Репрезентативная гистограмма, показывающая экзогенное связывание Gal-9 в клетках CD4 ⁺ по сравнению с контрольными изотипическими уровнями. (B) Количественное определение уровней белка Gal-9 с использованием средней интенсивности флуоресценции (MFI) Gal-9. Данные выражены как среднее ± SEM (n=4). Статистический анализ проводили с помощью Т-критерия Стьюдента; * P <0,05 по сравнению с BSA. Наивные Т-клетки CD4 ⁺ дифференцировали с активационным коктейлем (CD3/CD28, IL2, TGFβ) или только Gal-9 в течение 5 дней. (C, D) Проточная цитометрия использовалась для измерения % положительной экспрессии CD4 ⁺ , CD25 ⁺ и Foxp3 ⁺ . (E) Собирали супернатанты клеточных культур и измеряли уровни IL-10 с помощью ELISA.Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего (n=3). Статистический анализ проводили с помощью одностороннего ANOVA с множественными сравнениями Тьюки; *Р < 0,05.

Обсуждение

В присутствии натрия мочевая кислота в результате метаболизма пуринов выпадает в осадок в виде игл MSU и может способствовать развитию подагрического артрита, характеризующегося покраснением, жаром и припухлостью суставов (37). Анализы синовиальной жидкости и срезов тканей пациентов, страдающих подагрой, выявили наличие образования гранулем и нейтрофильных внеклеточных ловушек (НЭЛ), которые при длительном воздействии несут риск развития хронического воспаления (38).Патогенез хронического подагрического артрита сложен, и в его прогрессировании участвуют различные иммунологические факторы. Дисфункция Т-клеток (в частности, дисбаланс между Treg/Th27) играет существенную роль в возникновении и развитии заболевания. Действительно, восстановление защитных уровней Treg (36) или уменьшение самовоспроизводящегося воспалительного подмножества Th27 (5) представляет собой одну из ключевых иммунологических особенностей при подагрическом артрите.

Результаты нескольких исследований показали, что профиль экспрессии Gal-9 сильно повышен при многих воспалительных аутоиммунных заболеваниях, таких как системная красная волчанка (39), ревматоидный артрит (РА) (40, 41) и системный склероз (42) .Генные полиморфизмы в LGALS2, LGALS3 и LGALS9 связаны с предрасположенностью к РА (43). Исследования также предполагают участие Gal-9 в иммунопатогенезе системных воспалительных процессов (44) и в качестве проактивной контрольной точки сыворотки при РА (45).

В текущем исследовании использовалась модель острого подагрического артрита, управляемая MSU, и в этом контексте наши результаты показали, что инъекция кристаллов MSU (200 мкг/20 мкл) вызывала отек лодыжек (с пиком через 18 часов) и воспаление. Терапевтическое применение Gal-9 (9 мкг/20 мкл) значительно уменьшало отек лодыжек, наблюдаемый через 18 и 24 часа после введения кристаллов МСУ. Более того, наши результаты показали, что введение Gal-9 уменьшало инфильтрацию воспалительных клеток и уровни провоспалительных медиаторов, продуцируемых нейтрофилами/воспалительными моноцитами (например, IL-1α/β, TNF-α, JE, KC) и подтипами клеток Th27/Treg. (например, IL-10, IL-17, G-CSF) в локальном очаге воспаления, что указывает на противовоспалительный механизм действия Gal-9 в этой модели.

Чтобы выяснить, какие типы иммунных клеток рекрутируются преимущественно в ответ на кристаллы MSU, а какие на MSU в сочетании с обработкой Gal-9, мы использовали проточную цитометрию. Цитометрические данные показали, что нейтрофилы и воспалительные моноциты были основными признаками группы MSU по сравнению с CTRL со значительным увеличением инфильтрации Th27. Напротив, лечение Gal-9 поддерживало общее количество CD4 ⁺ и Treg на уровне CTRL, в то же время отменяя любое вызванное MSU увеличение количества Th27, тем самым поддерживая баланс Th27/Treg. Кроме того, лечение Gal-9 явно подавляло первоначальный врожденный иммунный ответ со значительным снижением рекрутирования нейтрофилов и воспалительных моноцитов. Это в сочетании со снижением местных медиаторов воспаления может иметь большое влияние на вторичную волну рекрутирования Т-клеток и последующее усиление воспалительного ответа. Рауччи и его коллеги недавно продемонстрировали важность Т-клеток в патогенезе этой модели подагрического артрита (5).Они подчеркнули, что подавление клеток Th27 с помощью нейтрализующего антитела против IL-17 приводило к повышенным уровням циркулирующих Treg, что, в свою очередь, ускоряло разрешение воспаления, что указывает на потенциальную модулирующую роль Treg при подагрическом воспалении MSU. В другой экспериментальной модели аутоиммунного артрита было показано, что терапевтическое применение Gal-9 ингибирует развитие клеток Th27 и способствует размножению клеток Treg (23). Авторы показали, что Gal-9 подавляет артрит дозозависимым образом, ингибируя экспрессию провоспалительных цитокинов, в основном IL-17, IL-12 и IFN-γ в суставах. Предыдущие исследования показали, что Gal-9 избирательно индуцирует апоптоз в клетках Th2 и Th27 посредством взаимодействия с TIM-3 (46, 47). Это также может быть потенциальным способом действия в этом текущем исследовании и требует дальнейшего изучения.

Ранее у человека была продемонстрирована экспрессия и роль Gal-9 в развитии аутоиммунного артрита с повышенной экспрессией этого белка в синовиальной жидкости пациентов с РА по сравнению с пациентами с остеоартритом (21). Совсем недавно исследование Sun et al.продемонстрировали, что экспрессия Gal-9 в Т-клетках положительно коррелирует с активностью заболевания и потенциально может использоваться в качестве нового биомаркера для оценки активности и терапевтического эффекта РА (40). Было показано, что модуляция Gal-9 RA через регуляцию активности/жизнеспособности синовиальных фибробластов является сложной, при этом эндогенный Gal-9 защищает синовиальные фибробласты от апоптоза (48), в то время как экзогенный Gal-9 индуцирует апоптоз в фибробластоподобные синовиоциты у пациентов с РА (21). Здесь мы селективно выделили человеческие наивные CD4 ⁺ Т-клетки и обработали их Gal-9, чтобы оценить способность Gal-9 управлять дифференцировкой Т-клеток человека. В соответствии с предыдущими исследованиями (49, 50) мы обнаружили, что только Gal-9 эффективно индуцирует дифференцировку Treg дозозависимым образом. Кроме того, также наблюдалось дозозависимое увеличение уровней IL-10 в супернатантах культур Т-клеток, обработанных Gal-9, что свидетельствует об особой роли Gal-9 в индукции функций Treg (т.е. продукции IL-10).

В заключение, наши результаты показывают, что Gal-9 играет решающую роль в регулировании острого воспаления и разрешении, связанном с подагрическим артритом, путем локального поддержания популяции противовоспалительных Treg в месте воспаления при одновременном снижении уровня Th27. Введение Gal-9 может обеспечить новую терапевтическую стратегию для предотвращения повреждения тканей, связанного с подагрическим артритом.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без неоправданных оговорок.

Заявление об этике

Кровь была взята у здоровых доноров с письменного и устного информированного согласия и одобрения Местного комитета по этике Университета Бирмингема (ERN_18-0382). Пациенты/участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании. Все процедуры по уходу за животными и экспериментальные процедуры проводились в соответствии с международными и национальными законами и политиками и были одобрены Министерством здравоохранения Италии. Об исследованиях на животных сообщалось в соответствии с рекомендациями ARRIVE и рекомендациями Директивы ЕС 2010/63/ЕС для экспериментов на животных.

Вклад авторов

AM, FR, AS, ST и FM провели эксперименты. AM, FR, FM и AI проанализировали результаты и сделали цифры. AI и FM разработали исследование. AM, FR, FM и AI написали статью. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Программа AM поддерживается финансируемой государством стипендией KSA. FR поддерживается стипендией Федерико II Университета Неаполя для доктора фармацевтических наук. AS поддерживается Dompé Farmaceutici S.p. Стипендия для докторской программы «Нутрицевтики, функциональные продукты питания и здоровье человека» (Неаполитанский университет имени Федерико II). ИИ поддерживается Бирмингемским товариществом.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Примечание издателя

Все утверждения, изложенные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно представляют претензии их дочерних организаций или издателя, редакторов и рецензентов.Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или претензии, которые могут быть сделаны его производителем, не гарантируются и не поддерживаются издателем.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www. frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2021.762016/full#supplementary-material

Дополнительный рисунок 1 | Мышей обрабатывали Gal-9 (1-9 мкг/20 мкл) или носителем (PBS, 20 мкл) через 30 минут после внутривенного введения. стимуляция кристаллами МСУ (200 мкг/20 мкл) правых коленных суставов. (A) Оценка воспаления суставов (0–3 с шагом 0,25) и (B) Воспаление суставов, отек оценивали через 4, 18, 24 и 48 часов после MSU. Данные (выраженные в виде оценки воспаления суставов и Δ увеличения коленных суставов в мм соответственно) представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для n = 6 мышей в группе. Статистический анализ проводился с помощью одно- или двухфакторного дисперсионного анализа с последующим анализом Бонферрони для множественных сравнений. ^# P ≤ 0,05, ^## P ≤ 0,01, ^#### P ≤ 0,0001 vs Контрольная группа; *Р ≤ 0.05, **P ≤ 0,01, ***P ≤ 0,001, ****P ≤ 0,0001 против группы MSU.

Сокращения

АПК, антигенпрезентирующие клетки; BLC, хемоаттрактант В-лимфоцитов; с5/с5а, компонент 5а; CRDs, домены узнавания углеводов; CTRL, Управление; ДМСО, диметилсульфоксид; G-CSF, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор; Гал-, Галектин-; FBS, эмбриональная бычья сыворотка; и.а., внутрисуставно; ИЛ-, интерлейкин-; JE, соединительный эпителий; KC, хемоаттрактант кератиноцитов; MCP-5, хемоаттрактантный белок-5 моноцитов; M-CSF, макрофагальный колониестимулирующий фактор; MAPK, митоген-активируемая протеинкиназа; MIG, монокин, индуцированный интерфероном-γ, MIP, воспалительный белок макрофагов; МСУ, урат натрия; NETs, ​​нейтрофильные внеклеточные ловушки; PDI, протеиндисульфидизомераза; РА, ревматоидный артрит; SDF-1, IL-1β фактор-1, полученный из стромальных клеток; sICAM-1, молекулярная межклеточная адгезия-1; TGF-β, трансформирующий фактор роста-β; Th27, Т-хелперные клетки 17; TIM-3, Т-клеточный иммуноглобулин муцин-3; ТИМП-1, ингибитор металлопептидазы-1; TNF-α, фактор некроза опухоли-α; Treg, регуляторные Т-клетки; TREM-1, запускающий рецептор, экспрессируемый на миелоидных клетках-1.

Ссылки

2. Ханноди С., Насуруддин Д.Н. Острая воспалительная реакция. В: StatPearls . Остров сокровищ (Флорида: StatPearls Publishing LLC (2021). StatPearls Publishing Copyright © 2021.

Google Scholar

3. Ley K, Laudanna C, Cybulsky MI, Nourshargh S. Как добраться до места воспаления: обновление каскада адгезии лейкоцитов Nat Rev Immunol (2007) 7(9):678–89.Раджакариар Р., Лоуренс Т., Быстром Дж., Хиллиард М., Колвилл-Нэш П., Беллинган Г. и др. Выявлена ​​новая двухфазная роль лимфоцитов при разрешении воспаления. Кровь (2008) 111(8):4184–92. doi: 10.1182/blood-2007-08-108936

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

5. Raucci F, Iqbal AJ, Saviano A, Minosi P, Piccolo M, Irace C, et al. Нейтрализующее антитело IL-17A регулирует подагрическое воспаление, вызванное кристаллами урата натрия. Pharmacol Res (2019) 147:104351.doi: 10.1016/j.phrs.2019.104351

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

6. Kadiyoran C, Zengin O, Cizmecioglu HA, Tufan A, Kucuksahin O, Cure MC, et al. Соотношение моноцитов к лимфоцитам, соотношение нейтрофилов к лимфоцитам и ширина распределения эритроцитов связаны с подагрическим артритом. Acta Med (Градец Кралове) (2019) 62(3):99–104. doi: 10.14712/18059694.2019.132

Полный текст CrossRef | Google Scholar

8. Luo CY, Wang L, Sun C, Li DJ.Эстроген усиливает функции регуляторных Т-клеток CD4(+)CD25(+)Foxp3(+), которые подавляют дифференцировку остеокластов и резорбцию кости in vitro. Cell Mol Immunol (2011) 8(1):50–8. doi: 10.1038/cmi.2010.54

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

9. Wu M, Tian Y, Wang Q, Guo C. Подагра: болезнь, связанная со сложными иммуновоспалительными реакциями: описательный обзор. Clin Rheumatol (2020) 39(10):2849–59. doi: 10.1007/s10067-020-05090-8

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

11.Arellano B, Graber DJ, Sentman CL. Регуляторная Т-клеточная терапия аутоиммунитета. Дисков Мед (2016) 22(119):73–80.

Реферат PubMed | Google Scholar

12. Maione F, Paschalidis N, Mascolo N, Dufton N, Perretti M, D’Acquisto F. Interleukin 17 Поддерживает, а не вызывает воспаление. Biochem Pharmacol (2009) 77(5):878–87. doi: 10.1016/j.bcp.2008.11.011

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

13. Zhou L, Lopes JE, Chong MM, Ivanov II, Min R, Victora GD, et al.TGF-бета-индуцированный Foxp3 ингибирует дифференцировку клеток T(H)17, противодействуя функции RORgammat. Природа (2008) 453(7192):236–40. doi: 10.1038/nature06878

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

14. Seetharaman J, Kanigsberg A, Slaaby R, Leffler H, Barondes SH, Rini JM. Рентгеновская кристаллическая структура домена распознавания углеводов галектина-3 человека с разрешением 2,1-A. J Biol Chem (1998) 273(21):13047–52. doi: 10. 1074/jbc.273.21.13047

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

15. Hirabayashi J, Hashidate T, Arata Y, Nishi N, Nakamura T, Hirashima M, et al. Олигосахаридная специфичность галектинов: поиск с помощью фронтальной аффинной хроматографии. Биохим Биофиз Акта (2002) 1572(2-3):232–54. doi: 10.1016/S0304-4165(02)00311-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

17. Сато М., Ниши Н., Сёдзи Х., Секи М., Хашидатэ Т., Хирабаяши Дж. и др.Функциональный анализ доменов узнавания углеводов и линкерного пептида галектина-9 в отношении активности хемоаттрактантов эозинофилов. Гликобиология (2002) 12(3):191–7. doi: 10.1093/glycob/12.3.191

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

18. Tsuchiyama Y, Wada J, Zhang H, Morita Y, Hiragushi K, Hida K, et al. Эффективность галектинов в улучшении нефротоксического сывороточного нефрита у крыс Wistar Kyoto. Kidney Int (2000) 58(5):1941–52. doi: 10.1111/j.1523-1755.2000.00366.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

19. Yamauchi A, Dai SY, Nakagawa R, Kashio Y, Abe H, Katoh S, et al. Галектин-9 индуцирует созревание дендритных клеток, происходящих из моноцитов человека. Nihon Rinsho Men’eki Gakkai kaishi = Japanese J Clin Immunol (2005) 28(6):381–8. doi: 10.2177/jsci.28.381

Полный текст CrossRef | Google Scholar

20. Андерсон А.С., Андерсон Д.Е., Бреголи Л., Гастингс В.Д., Кассам Н., Лей С. и другие.Стимуляция воспаления тканей иммунным рецептором Tim-3, экспрессируемым на врожденных иммунных клетках. Science (2007) 318(5853):1141–3. doi: 10.1126/science.1148536

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

21. Seki M, Sakata KM, Oomizu S, Arikawa T, Sakata A, Ueno M, et al. Благотворное влияние галектина 9 на ревматоидный артрит путем индукции апоптоза синовиальных фибробластов. Arthritis Rheum (2007) 56(12):3968–76. doi: 10.1002/art.23076

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

22.Chen HY, Wu YF, Chou FC, Wu YH, Yeh LT, Lin KI и другие. Внутриклеточный галектин-9 усиливает передачу сигналов проксимального TCR и потенцирует аутоиммунные заболевания. J Immunol (2020) 204(5):1158–72. doi: 10.4049/jimmunol.14

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

23. Seki M, Oomizu S, Sakata KM, Sakata A, Arikawa T, Watanabe K, et al. Галектин-9 подавляет образование Th27, способствует индукции регуляторных Т-клеток и регулирует экспериментальный аутоиммунный артрит. Clin Immunol (2008) 127(1):78–88. doi: 10.1016/j.clim.2008.01.006

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

24. Оомизу С., Арикава Т., Ники Т., Кадоваки Т., Уэно М., Ниши Н. и др. Галектин-9 подавляет развитие клеток Th27 зависимым от IL-2, но независимым от Tim-3 способом. Clin Immunol (2012) 143(1):51–8. doi: 10.1016/j.clim.2012.01.004

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

25. Килкенни С., Браун В.Дж., Катхилл И.С., Эмерсон М., Альтман Д.Г.Улучшение отчетности о биологических исследованиях: Руководство ARRIVE по отчетности об исследованиях на животных. J Pharmacol Pharmacotherapys (2010) 1(2):94–9. doi: 10.4103/0976-500X.72351

Полный текст CrossRef | Google Scholar

26. McGrath JC, Lilley E. Внедрение рекомендаций по отчетности об исследованиях с использованием животных (ARRIVE и т. д.): новые требования к публикации в BJP. Br J Pharmacol (2015) 172(13):3189–93. doi: 10.1111/bph.12955

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

27.Руис-Миязава К.В., Стауренго-Феррари Л., Мизоками С.С., Домисиано Т.П., Вичентини Ф., Камилиос-Нето Д. и др. Кверцетин ингибирует подагрический артрит у мышей: индукция опиоидно-зависимой регуляции воспаления. Инфламофармакология (2017). doi: 10.1007/s10787-017-0356-x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

28. Raucci F, Iqbal AJ, Saviano A, Casillo GM, Russo M, Lezama D, et al. Данные углубленного иммунофенотипирования, касающиеся модуляции IL-17Ab циркулирующих клеток Treg/Th27 и in situ инфильтрированных воспалительных моноцитов в начале подагрического воспаления. Краткий обзор данных (2019) 25:104381. doi: 10.1016/j.dib.2019.104381 ​​

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

29. Trevisan G, Hoffmeister C, Rossato MF, Oliveira SM, Silva MA, Silva CR, et al. Стимуляция рецепторов TRPA1 перекисью водорода имеет решающее значение для запуска гипералгезии и воспаления в модели острой подагры. Free Radic Biol Med (2014) 72:200–9. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2014.04.021

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

30.Акицу А., Исигаме Х., Какута С., Чанг С.Х., Икеда С. , Симидзу К. и др. У мышей с дефицитом антагониста рецептора IL-1 развивается аутоиммунный артрит из-за внутренней активации CCR2(+)Vγ6(+)γδ Т-клеток, продуцирующих IL-17. Nat Commun (2015) 6:7464. doi: 10.1038/ncomms8464

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

31. Riedhammer C, Halbritter D, Weissert R. Мононуклеарные клетки периферической крови: выделение, замораживание, оттаивание и культивирование. Methods Mol Biol (2016) 1304:53–61.doi: 10.1007/7651_2014_99

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

32. Kapellos TS, Taylor L, Feuerborn A, Valaris S, Hussain MT, Rainger GE, et al. Дефицит каннабиноидного рецептора 2 усугубляет воспаление и набор нейтрофилов. FASEB J (2019) 33(5):6154–67. doi: 10.1096/fj.201802524R

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

33. Рагаб Г., Эльшахали М., Бардин Т. Подагра: старая болезнь в новой перспективе – обзор. J Advanced Res (2017) 8(5):495–511. doi: 10.1016/j.jare.2017.04.008

Полный текст CrossRef | Google Scholar

35. Caution K, Young N, Robledo-Avila F, Krause K, Abu Khweek A, Hamilton K, et al. Каспаза-11 опосредует хемотаксис нейтрофилов и образование внеклеточных ловушек во время острого подагрического артрита посредством изменения фосфорилирования кофилина. Фронт Иммунол (2019) 10:2519. doi: 10.3389/fimmu.2019.02519

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

36.Dai XJ, Tao JH, Fang X, Xia Y, Li XM, Wang YP и др. Изменения соотношения Treg/Th27 в селезенке крыс с острым подагрическим артритом, индуцированные кристаллами MSU. Воспаление (2018) 41(5):1955–64. doi: 10.1007/s10753-018-0839-y

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

38. Schorn C, Janko C, Krenn V, Zhao Y, Munoz LE, Schett G, et al. Склеивание врага – Нейтрофилы NETting иммобилизуют провоспалительные кристаллы урата натрия. Фронт Иммунол (2012) 3:376.doi: 10.3389/fimmu.2012.00376

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

39. Matsuoka N, Fujita Y, Temmoku J, Furuya MY, Asano T, Sato S, et al. Галектин-9 как биомаркер активности заболевания при системной красной волчанке. PloS One (2020) 15(1):e0227069. doi: 10.1371/journal.pone.0227069

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

40. Sun J, Sui Y, Wang Y, Song L, Li D, Li G и др. Экспрессия галектина-9 коррелирует с терапевтическим эффектом при ревматоидном артрите. Научный представитель (2021) 11(1):5562. doi: 10.1038/s41598-021-85152-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

41. Fujita Y, Asano T, Matsuoka N, Temmoku J, Sato S, Matsumoto H, et al. Дифференциальная регуляция и корреляция между галектином-9 и антителом к ​​ЦЦП (ACPA) у пациентов с ревматоидным артритом. Лечение артрита Ther (2020) 22(1):80. doi: 10.1186/s13075-020-02158-3

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

42.Чихара М., Курита М., Йошихара Ю., Асахина А., Янаба К. Клиническое значение уровней галектина-9 в сыворотке и растворимого CD155 у пациентов с системным склерозом. J Immunol Res (2018) 2018:9473243. doi: 10.1155/2018/9473243

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

43. Xu WD, Wu Q, He YW, Huang AF, Lan YY, Fu L, et al. Генные полиморфизмы LGALS2, LGALS3 и LGALS9 у пациентов с ревматоидным артритом. Cell Immunol (2021) 368:104419.doi: 10.1016/j.cellimm.2021.104419

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

44. Gualberto Cavalcanti N, Melo Vilar K, Branco Pinto Duarte AL, Barreto de Melo Rêgo MJ, Pereira MC, da Rocha Pitta I, et al. Повышенный уровень галектина-9 в сыворотке у пациентов с лихорадкой чикунгунья. Virus Res (2020) 286:198062. doi: 10.1016/j. virusres.2020.198062

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

45. Matsumoto H, Fujita Y, Matsuoka N, Temmoku J, Yashiro-Furuya M, Asano T, et al.Молекулы контрольной точки сыворотки у пациентов с IgG4-связанным заболеванием (IgG4-Rd). Arthritis Res Ther (2021) 23(1):148. doi: 10.1186/s13075-021-02527-6

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

46. Zhu C, Anderson AC, Schubart A, Xiong H, Imitola J, Khoury SJ, et al. Лиганд Tim-3 галектин-9 отрицательно регулирует иммунитет Т-хелперов 1 типа. Nat Immunol (2005) 6(12):1245–52. doi: 10.1038/ni1271

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

47.ван де Вейер П.С., Мюльфейт М., Клозе К., Бонвентре Дж.В., Вальц Г., Кюн Э.В. Высококонсервативный тирозин Tim-3 фосфорилируется при стимуляции его лигандом галектином-9. Biochem Biophys Res Commun (2006) 351(2):571–6. doi: 10.1016/j.bbrc.2006. 10.079

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

48. Pearson MJ, Bik MA, Ospelt C, Naylor AJ, Wehmeyer C, Jones SW, et al. Эндогенный галектин-9 подавляет апоптоз в синовиальных фибробластах человека при ревматоидном артрите. Научный представитель (2018) 8(1):12887. doi: 10.1038/s41598-018-31173-3

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

49. Панг Н., Алиму Х., Чен Р., Мухаши М., Ма Дж., Чен Г. и др. Активированный галектин-9/Tim3 стимулирует Treg и подавляет эффекторную функцию Th2 при хроническом лимфоцитарном лейкозе. FASEB J (2021) 35(7):e21556. doi: 10.1096/fj.202100013R

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

50. Ju Y, Shang X, Liu Z, Zhang J, Li Y, Shen Y и др.Путь Tim-3/галектин-9 участвует в гомеостазе печеночных Treg в мышиной модели гепатита, индуцированного конканавалином А. Мол Иммунол (2014) 58(1):85–91. doi: 10.1016/j. molimm.2013.11.001

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

404 Не найдено | ЦитоРешение

Сельскохозяйственные науки, 2015, 6, 630-662 © 2015, авторы и издательство Scientific Research Publishing Inc.

Резюме:

Оценка безопасности генетически модифицированных организмов (ГМО) является спорной темой.Сторонники ГМО утверждают, что ГМО безопасны, поскольку политика существенной эквивалентности FDA считает ГМО «эквивалентными» их аналогам, не содержащим ГМО, и утверждают, что генетическая модификация (ГМ) является просто продолжением «естественного» процесса селекции растений, форме «генетической модификации», хотя и в более длительных временных масштабах. Активисты против ГМО возражают, что ГМО небезопасны, поскольку существенная эквивалентность ненаучна и устарела, поскольку она возникла в 1970-х годах для оценки безопасности медицинских устройств, которые несопоставимы со сложностью биологических систем, и утверждают, что целевые ГМО не являются селекцией растений. Суть дебатов, по-видимому, заключается в методологии, используемой для определения критериев существенной эквивалентности. Системная биология, которая стремится понять сложность всего организма как системы, а не просто изучать его части в редукционистской манере, может предоставить основу для определения соответствующих критериев, поскольку она признает, что ГМ, малые или большие, могут влиять на эмерджентные процессы. свойства всей системы. Здесь многообещающий метод биологии вычислительных систем объединяет известные возмущения пяти биомолекул, вызванные CP4 EPSPS GM Glycine max L.(соя) с интегративной моделью метаболизма С1 и окислительного стресса (две молекулярные системы, имеющие решающее значение для функционирования растений). Результаты предсказывают значительное накопление формальдегида и сопутствующее истощение глутатиона в ГМО, предполагая, как «маленький» и одиночный ГМ создает «крупные» и системные нарушения равновесия молекулярных систем. Регулирующие органы, которые в настоящее время пересматривают правила безопасности ГМО, возможно, пожелают принять подход системной биологии, используя комбинацию in silico, вычислительных методов, используемых здесь, и последующих целевых экспериментальных разработок in vitro и in vivo, чтобы разработать системное понимание «эквивалентности». использование биомаркеров, таких как формальдегид и глутатион, которые предсказывают метаболические нарушения, для модернизации оценки безопасности ГМО.

ПРАЙМ PubMed | Галектин-9 регулирует подагрическое воспаление, индуцированное кристаллами урата натрия, посредством модуляции соотношения Treg/Th27

Цитирование

Mansour, Adel Abo, et al. «Галектин-9 регулирует подагрическое воспаление, вызванное кристаллами урата натрия, посредством модуляции соотношения Treg / Th27». Frontiers in Immunology, vol. 12, 2021, с. 762016.

Мансур А.А., Рауччи Ф., Савиано А. и др. Галектин-9 регулирует подагрическое воспаление, вызванное кристаллами урата натрия, посредством модуляции соотношения Treg/Th27. Фронт Иммунол . 2021;12:762016.

Мансур, А. А., Рауччи, Ф., Савиано, А., Талл, С., Майоне, Ф., и Икбал, А. Дж. (2021). Галектин-9 регулирует подагрическое воспаление, вызванное кристаллами урата натрия, посредством модуляции соотношения Treg/Th27. Frontiers in Immunology , 12 , 762016. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.762016

Mansour AA, et al. Галектин-9 регулирует подагрическое воспаление, вызванное кристаллами урата натрия, посредством модуляции соотношения Treg/Th27. Фронт Иммунол. 2021;12:762016. PubMed PMID: 34777378.

TY – JOUR T1 – Галектин-9 регулирует подагрическое воспаление, вызванное кристаллами урата натрия, посредством модуляции соотношения Treg/Th27. AU – Мансур, Адель Або, AU – Рауччи, Федерика, AU – Савиано, Анелла, AU – Талл, Саманта, AU – Майоне, Франческо, AU – Икбал, Асиф Джилани, Y1 – 28.10.2021/ ПЯ – 20.08.2021/получил PY – 14.10.2021/принято PY – 15.11.2021/антрез PY – 16.11.2021/опубликовано PY – 16.11.2021/medline KW – кристаллы МСУ KW – цитохемокины KW – галектин-9 (Gal-9) КВ – подагра КВ – воспаление СП – 762016 ЭП – 762016 JF – Границы в иммунологии JO – Фронт Иммунол ВЛ – 12 N2 – Подагра вызывается отложением кристаллов моноурата натрия (МУН) в области сустава. Инфильтрация нейтрофилами и моноцитами вызывает начальный воспалительный ответ, за которым следуют лимфоциты. Интересно, что новые данные подтверждают мнение о том, что дисбаланс in situ Т-хелперных клеток 17 (Th27)/регуляторных Т-клеток (Treg) влияет на последующее повреждение тканей-мишеней. Галектин-9 (Gal-9) является модулятором врожденного и адаптивного иммунитета с про- и противовоспалительными функциями, в зависимости от его экспрессии и локализации в клетке. Однако специфические клеточные и молекулярные механизмы, с помощью которых Gal-9 модулирует воспалительную реакцию в начале и при прогрессировании подагрического артрита, еще предстоит выяснить.В этом исследовании мы стремились всесторонне охарактеризовать функциональную роль экзогенного Gal-9 в модели in vivo подагрического воспаления, индуцированного кристаллами MSU, путем мониторинга in situ нейтрофилов, моноцитов и рекрутированных фенотипов Th27/Treg и связанных цито-хемокинов. профиль. Лечение Gal-9 выявило дозозависимое снижение показателей воспаления суставов, отека коленного сустава и экспрессии различных провоспалительных цитохемокинов. Кроме того, анализ проточной цитометрии выявил значительную модуляцию инфильтрирующих воспалительных моноцитов (CD11b+/CD115+/LY6-Chi) и клеток Th27 (CD4+/IL-17+)/Treg (CD4+/CD25+/FOXP-3+) после лечения Gal-9. .В совокупности результаты, представленные в этом исследовании, показывают, что введение Gal-9 может обеспечить новую терапевтическую стратегию для предотвращения повреждения тканей при подагрическом артритном воспалении и, возможно, при других воспалительных заболеваниях. СН – 1664-3224 UR – https://www.unboundmedicine.com/medline/citation/34777378/galectin-9_regulates_monosodium_urate_crystal-induced_gouty_inflammation_through_the_modulation_of_treg/th27_ratio. L2 — https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.762016 ДБ – ПРАЙМ ДП – Свободная медицина Скорая помощь –

Кровь в моче (гематурия): симптомы, причины и лечение

Обзор

Мочевая система

Что такое гематурия?

Гематурия – это наличие клеток крови в моче.Гематурию можно назвать макроскопической или микроскопической.

• Макрогематурия возникает, когда в моче присутствует достаточное количество крови, которое видно невооруженным глазом. Он может окрасить туалетную воду в бледно-розовый или ярко-красный цвет.
• Микрогематурия возникает в результате присутствия крови в моче, которую можно увидеть только под микроскопом.
• Гематурия на тест-полоске возникает, когда окисление тест-полоски мочи вызывает изменение цвета. Это не всегда означает, что в моче присутствуют клетки крови.

Симптомы и причины

Каковы причины гематурии?

Может быть несколько различных причин гематурии, некоторые более серьезные, чем другие. Эти условия включают, но не ограничиваются:

Обратите внимание, что моча также может менять цвет из-за выбора пищи. Такие продукты, как свекла, ежевика и ревень, а также продукты с большим количеством красителей могут вызвать изменение цвета мочи.

Каковы симптомы гематурии?

Хотя кровь в моче не всегда является важным симптомом заболевания, она может быть важным предупредительным признаком возможной проблемы со здоровьем.

Кровавую мочу никогда нельзя игнорировать. Немедленно обратитесь к врачу, если в моче обнаружена кровь, особенно если вы также страдаете от:

Диагностика и тесты

Как диагностируется гематурия?

Во время визита к врачу он или она соберет анамнез и проведет медицинский осмотр. Это поможет врачу лучше понять ваши симптомы. Ваш врач может назначить другие анализы. Эти тесты могут включать:

• Анализ мочи: Анализ образца мочи.
• Посев мочи: Анализ мочи на наличие инфекции.
• Цитологическое исследование мочи: Анализ мочи на наличие аномальных клеток.
• Цистоскопия : Тест, при котором используется устройство, называемое цистоскопом, для исследования внутренней части мочевого пузыря и уретры.
• Компьютерная томография (КТ) : Тест, в котором используются рентгеновские лучи и компьютеры для получения поперечных изображений брюшной полости и таза.

Управление и лечение

Как лечится гематурия?

Лечение гематурии сильно зависит от действительной причины появления крови в моче. Информация, собранная из истории болезни, физического осмотра и любых результатов анализов, будет использоваться для определения наилучшего варианта лечения.

При гематурии, вызванной, например, ИМП, обычным лечением является использование антибиотиков. Эти антибиотики убивают бактерии, вызывающие ИМП, что должно остановить кровотечение.

Профилактика

Кто подвержен риску гематурии?

Кровь в моче чаще всего бывает у людей с уже существующими заболеваниями, вызывающими гематурию, например, перечисленными в разделе, посвященном причинам гематурии. Однако определенные действия могут увеличить шансы человека на наличие крови в моче. К ним относятся:

• Курение
• Злоупотребление обезболивающими
• Воздействие некоторых химических веществ
• Воздействие радиации
• Бег или бег трусцой на длинные дистанции

Избегание этих действий может снизить вероятность появления крови в моче.

Жить с

Когда мне следует обратиться к врачу?

Кровь в моче ни в коем случае нельзя игнорировать. Очень важно связаться со своим врачом или поставщиком медицинских услуг, если вы видите кровь в моче или если у вас есть другие симптомы, связанные с гематурией.

Не пора ли переосмыслить культуру средней порции мочи для диагностики ИМП?

Новости

---

Исследования показывают, что MSU может не подходить для исключения ИМП у пациентов с симптомами нижних мочевыводящих путей.

Исследование показало, что MSU пропускают «значительную часть» бактерий.

---

Посев средней порции мочи (MSU) в настоящее время считается золотым стандартом диагностики инфекции мочевыводящих путей (ИМП) у взрослых.

Однако недавнее исследование, опубликованное в журнале Journal of Clinical Microbiology , ставит под сомнение, должно ли оно оставаться на лидирующих позициях.

В исследовании изучались образцы мочи 33 пациентов с хроническими симптомами нижних мочевыводящих путей (СНМП), пришедших на первый прием, 30 пациентов с СНМП, получавших лечение, у которых симптомы рецидивировали, и 29 бессимптомных пациентов из контрольной группы.

Исследователи сравнили возможности бактериального обогащения культуры MSU с возможностями 50 мкл нецентрифугированной культуры, 30 мл центрифугированной осадочной культуры и секвенированием гена 16S рРНК.

«Мы показали, что рутинная культура MSU с применением британских критериев интерпретации, адаптированных к острой ИМП, не смогла обнаружить различные виды бактерий, включая признанные уропатогены», — пишут авторы.

Они пришли к выводу, что диагностический MSU не может отличить пациентов от контрольной группы.

«Эта работа поставила МГУ лицом к лицу с современными методами анализа ДНК — и потерпела сокрушительный провал», — исследователь д-р Дженнифер Рон, заведующая кафедрой урологической биологии в отделении почечной медицины Университетского колледжа Лондона в медицинском отделении Королевской бесплатной больницы. , сказал.

«С другой стороны, геномное секвенирование с использованием обогащенных образцов мочи легко позволило выявить людей, которые действительно были больны».

В рамках исследования исследователи обнаружили, что менее 10% пациентов с клинически подозреваемой ИМП имели положительный результат MSU, и только у четырех из 33 новых культур пациентов наблюдался немикробный рост в количестве 10 ⁵ КОЕ/мл.

Напротив, секвенирование бактериальной ДНК выявило бактерии, в том числе признанные уропатогены, у 32 новых пациентов. К ним относятся пациенты с симптомами, у которых, как сообщалось, был отрицательный MSU.

В заключение исследование показало, что протокол MSU «упускает значительную часть бактерий».

Поэтому исследователи заявляют, что MSU «может быть непригодным для исключения ИМП у пациентов с СНМП», и советуют лицам, ответственным за выявление, диагностику ИМП и уход за пациентами, «быть осторожными при интерпретации отрицательного MSU или MSU смешанного роста у пациентов с симптомами». ‘.

Доктор Рон сказал, что MSU уже некоторое время находятся под подозрением в качестве диагностического теста.

«У нас были подозрения об этом в течение многих лет, — сказала она. «Это действительно доказывает это впервые».

Д-р Рон сказал, что смущение и стигма в отношении ИМП, а также консервативное мышление в медицине могут быть одной из причин, по которым эта проблема остается на заднем плане.

«Я чувствую, что в медицине этим пренебрегают, потому что этими людьми пренебрегают», — сказала она.

«Это действительно грустно. Люди рассказывают такие же истории: «Я прошу антибиотики, у меня симптомы уже 10 лет, но компьютер говорит «нет». Тест отрицательный».

«Я чувствую, что это в некотором роде моральный вопрос, что пациенты получают плохую сделку».

Это не первое исследование, в котором ставится под вопрос полезность MSU для выявления ИМП.

Исследование, опубликованное в журнале Journal of Clinical Microbiology в мае 2016 года, показало, что по сравнению с количественной культурой мочи с расширенным спектром (EQUC) стандартная культура мочи пропускает 67% всех обнаруженных уропатогенов и 88% не- E. coli уропатогены.

Профессор Джеймс Мэлоун-Ли — мировой лидер в области изучения хронических ИМП, работавший над самыми последними исследованиями. Он также критически относится к диагностическим возможностям МГУ.

«Тест, который мы в настоящее время используем для выявления инфекций мочевыводящих путей, является примитивным и никогда не был должным образом проверен», — сказал он.

«Мы все еще используем тот же тест, что и 70 лет назад».

Наряду с вопросом о том, является ли MSU лучшим тестом для выявления ИМП, профессор Мэлоун-Ли также считает, что ИМП могут быть хроническими.Он сказал, что у пациентов с хронической ИМП могут быть бактерии, которые попадают внутрь слизистой оболочки мочевого пузыря и, следовательно, не могут быть обнаружены в моче, что делает MSU устаревшим в качестве диагностического инструмента.

В таких случаях, по словам профессора Мэлоун-Ли, может потребоваться долгосрочная (даже до шести лет) максимальная доза мочевых антибиотиков первого поколения.

Многие факторы определяют, какой тест использовать для диагностики ИМП, включая стоимость, эффективность, простоту доступа и многое другое.

Так что же делать врачам общей практики, если они подозревают, что у пациента ИМП, но результат МСУ отрицательный?

«Нам следует пристальнее искать, если люди получают отрицательный результат, но имеют симптомы ИМП», — сказала Александра Моуат из Урогинекологического общества Австралии.

«В клиниках с большими ресурсами мы можем попросить микробиологов найти ДНК определенных бактерий, которые трудно культивировать, но которые, как известно, вызывают симптомы мочевого пузыря, такие как гонорея, хламидиоз и микоплазма».

Между тем, доктор Рон считает, что когда дело доходит до MSU, «нам срочно необходимо разработать альтернативные быстрые диагностические тесты, чтобы занять их место».

По данным Kidney Health Australia, примерно каждая вторая женщина и каждый 20-й мужчина заболевают ИМП в течение жизни.