Нк рф характеристика: Налоговый кодекс Российской Федерации (НК РФ) / КонсультантПлюс

Эрик Вивье

¹ Centre d’Immunologie de Marseille-Luminy (CIML), Université de la Méditerranée UM 631, Campus de Luminy, 13288 Марсель, Франция

² INSERM UMR-S 631, Марсель, Франция

³ CNRS, UMR6102, Марсель, Франция

⁴ Assistance Publique des Hôpitaux de Marseille, Франция, Марсель-де-ла-Консепшн, Франция

Дэвид Х.Raulet

⁵ Департамент молекулярной и клеточной биологии и Лаборатория исследований рака, Калифорнийский университет, Беркли, Беркли, Калифорния 94720–3200, США

Алессандро Моретта

⁶ Департамент экспериментальной медицины и Центр передового опыта в области биомедицины Research (CEBR), Университет Генуи, Италия

Майкл А. Калиджури

⁷ Комплексный онкологический центр Университета штата Огайо, Онкологическая больница Джеймса и Исследовательский институт имени Солова, Колумбус, Огайо 43220, США

Лоуренс Зитвогель

⁸ U1015 INSERM, Institut Gustave Roussy, 94805 Villejuif, France

Lewis L.Lanier

⁹ Департамент микробиологии и иммунологии и Институт исследования рака Калифорнийского университета в Сан-Франциско, Сан-Франциско, Калифорния 94143–0414, США

Уэйн М. Йокояма

¹⁰ Медицинский институт Говарда Хьюза, отделение ревматологии , Campus Box 8045, Медицинский факультет Вашингтонского университета, 660 South Euclid Avenue, Сент-Луис, MO 63110, США

Софи Уголини

¹ Центр иммунологии Марселя-Люмини (CIML), Université de la Méditerranée UM 631, Campus de Luminy, 13288 Марсель, Франция

² INSERM UMR-S 631, Марсель, Франция

³ CNRS, UMR6102, Марсель, Франция

¹ Centre d’Immunologie de Marseille-Luminy ( CIML), Université de la Méditerranée UM 631, Campus de Luminy, 13288 Марсель, Франция

² INSERM UMR-S 631, Марсель, Франция

³ CNRS, UMR6102, Марсель, Франция ce

⁴ Assistance Publique des Hôpitaux de Marseille, Hôpital de la Conception, Марсель, Франция

⁵ Департамент молекулярной и клеточной биологии и Лаборатория исследований рака, Калифорнийский университет, Беркли, Беркли, Калифорния 94720–3200, США

⁶ Департамент экспериментальной медицины и Центр передового опыта биомедицинских исследований (CEBR), Университет Генуи, Италия

⁷ Комплексный онкологический центр Университета штата Огайо, Онкологическая больница Джеймса и Исследовательский институт Солова, Колумбус, OH 43220, США

⁸ U1015 INSERM, Institut Gustave Roussy, 94805 Villejuif, France

⁹ Департамент микробиологии и иммунологии и Институт исследования рака Калифорнийского университета в Сан-Франциско, Сан-Франциско, CA 94143–0414, США

¹⁰ Медицинский институт Говарда Хьюза, отделение ревматологии, кампус 8045, Школа Вашингтонского университета л медицины, 660 Южный Евклид Авеню, Св.Louis, MO 63110, USA

^† Все авторы внесли равный вклад в эту работу.

Abstract

Природные киллеры (NK) первоначально были определены как эффекторные лимфоциты врожденного иммунитета, наделенные конститутивными цитолитическими функциями. Совсем недавно появилось более детальное представление о NK-клетках. В настоящее время признано, что NK-клетки экспрессируют набор активирующих и ингибирующих рецепторов, который откалиброван для обеспечения самотолерантности, обеспечивая при этом эффективность против таких атак, как вирусная инфекция и развитие опухоли.Более того, NK-клетки не реагируют инвариантно, а скорее приспосабливаются к окружающей среде. Наконец, недавние исследования показали, что NK-клетки также могут создавать форму антиген-специфической иммунологической памяти. Таким образом, NK-клетки выполняют сложные биологические функции, которые являются атрибутами как врожденного, так и адаптивного иммунитета, стирая функциональные границы между этими двумя ветвями иммунного ответа.

Иммунная система классически делится на врожденный и адаптивный иммунитет. Отличительные черты врожденного иммунитета обычно относятся к широко распространенному разнообразию миелоидных и лимфоидных клеток, которые могут проявлять быструю эффекторную функцию за счет ограниченного набора рецепторов, кодируемых зародышевой линией.Напротив, адаптивный иммунитет у млекопитающих характеризуется двумя типами лимфоцитов, Т- и В-клетками, клонально экспрессирующими большой репертуар антигенных рецепторов, продуцируемых сайт-специфической соматической рекомбинацией, то есть рецептор Т-клеток (TCR) и антитело / Рецептор В-клеток (BCR). Функционально наивные Т- и В-клетки сталкиваются с антигенами в специализированных лимфоидных органах и проходят процесс клеточного деления и созревания, прежде чем проявить свою эффекторную функцию. Естественные киллеры (NK) представляют собой подгруппу белых кровяных телец.С момента их идентификации в 1975 г. (1, 2) NK-клетки были классифицированы как лимфоциты на основе их морфологии, экспрессии многих лимфоидных маркеров и их происхождения из общих лимфоидных клеток-предшественников в костном мозге. Однако NK-клетки обычно считаются компонентами врожденной иммунной защиты, поскольку у них отсутствуют антиген-специфические рецепторы клеточной поверхности. Кроме того, несмотря на крайнюю редкость убедительных случаев селективной недостаточности NK-клеток у людей (база данных Online Mendelian Inheritance in Man 609981) (3), у людей и мышей было показано, что NK-клетки участвуют в раннем контроле против вирусной инфекции, особенно герпесвирусная инфекция (4) и в иммунном надзоре за опухолями (5).Отсутствие грубых аномалий у пациентов с Х-сцепленным тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID-X1), которые перенесли трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток (HSCT) или генную терапию IL2RG , но остаются неожиданно дефицитными по NK-клеткам, подтверждает возможность того, что NK-клетки могут выполнять избыточную функцию (6). Однако присутствие NK-клеток у млекопитающих, отличных от человека, и ортологов NK-клеток у других позвоночных свидетельствует об их важности (7). Примечательно, что NK-клетки отличаются своей способностью проникать в матку, где они, как было показано, вносят вклад в развитие эмбриона (8).Эти данные заставляют предположить, что роль NK-клеток во время репродукции способствовала их отбору.

Как NK-клетки способствуют иммунитету?

NK-клетки были первоначально описаны как цитолитические эффекторные лимфоциты, которые, в отличие от цитотоксических Т-клеток, могут напрямую вызывать гибель опухолевых клеток и инфицированных вирусом клеток в отсутствие специфической иммунизации; отсюда и их название. Впоследствии NK-клетки были признаны основными продуцентами цитокинов, таких как интерферон-γ (IFN-γ), во многих физиологических и патологических состояниях.NK-клетки также продуцируют ряд других цитокинов, как провоспалительных, так и иммунодепрессивных, таких как фактор некроза опухоли-α (TNF-α) и интерлейкин (IL) -10, соответственно, и факторы роста, такие как GM-CSF (колония гранулоцитов-макрофагов). стимулирующий фактор), G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор) и IL-3. NK-клетки также секретируют многие хемокины, включая CCL2 (MCP-1), CCL3 (MIP1-α), CCL4 (MIP1-β), CCL5 (RANTES), XCL1 (лимфотактин) и CXCL8 (IL-8) (9). В то время как биологическая функция факторов роста, секретируемых NK-клетками, еще не выяснена, их секреция хемокинов является ключом к их совместной локализации с другими гематопоэтическими клетками, такими как дендритные клетки (DC) в областях воспаления (10).Кроме того, продукция IFN-γ NK-клетками помогает формировать Т-клеточные ответы в лимфатических узлах, возможно, за счет прямого взаимодействия между наивными Т-клетками и NK-клетками, мигрирующими во вторичные лимфоидные компартменты из воспаленных периферических тканей, и путем косвенного воздействия на DC ( 11) (). Опосредованное NK-клетками уничтожение клеток-мишеней также влияет на ответы Т-клеток, возможно, за счет снижения антигенной нагрузки (12) и / или потому, что дебрис клеток-мишеней может способствовать перекрестной презентации антигена цитотоксическим Т-клеткам CD8 ⁺ (13) ().Хотя NK-клетки могут положительно (12, 13) или отрицательно (14) влиять на иммунитет Т- и В-клеток хозяина, в зависимости от природы антигенного заражения, возникает мнение, что NK-клетки являются не только цитолитическими эффекторными клетками против инфицированных микробами клеток. или опухолевые клетки. Напротив, цитотоксичность, опосредованная NK-клетками, и продукция цитокинов влияют на DC, макрофаги и нейтрофилы (10) и наделяют NK-клетки регуляторной функцией, влияющей на последующие антиген-специфические Т- и В-клеточные ответы. Напротив, «естественная» эффекторная функция NK-клеток была пересмотрена.NK-клетки требуют праймирования различными факторами, такими как IL-15, представленный DC (15) или макрофагами (16), IL-12 (17) или IL-18 (18), для достижения своего полного эффекторного потенциала, подчеркивая интимный регуляторный потенциал. взаимодействия между NK-клетками и другими компонентами иммунного ответа. Таким образом, NK-клетки, такие как Т- и В-клетки, участвуют в иммунитете по-разному и проходят процесс функционального созревания для выполнения этих функций.

Биологические функции NK-клеток. NK-клетки могут распознавать множество стрессированных клеток в отсутствие или в присутствии антител (синие стрелки).Активация NK-клеток, вызванная этим распознаванием, может привести к лизису целевой клетки и к продукции различных цитокинов и хемокинов в зависимости от природы стимуляции. В то время как NK-клетки склонны продуцировать IFN-γ во многих состояниях, существуют ситуации хронического или системного воспаления, которые способствуют секреции IL-10. NK также может взаимодействовать с DC многими различными способами, включая уничтожение незрелых DC NK-клетками и стимулирование созревания DC с помощью IFN-γ и TNF-α, происходящих из NK-клеток, что приводит к усилению презентации антигена Т-клеткам.Благодаря этой биологической активности NK-клетки участвуют в формировании последующего иммунного ответа; в изображенном примере NK-клетки усиливают или подавляют ответы макрофагов и Т-клеток посредством секреции IFN-γ (зеленые стрелки) или IL-10 (красные стрелки) соответственно.

Как регулируются NK-клетки?

NK-клетки оснащены набором рецепторов, которые могут либо стимулировать реактивность NK-клеток (активируя рецепторы), либо ослаблять реактивность NK-клеток (ингибирующие рецепторы) (19, 20). Активирующие рецепторы включают рецепторы, которые взаимодействуют с растворимыми лигандами, такими как цитокины, и рецепторы, которые взаимодействуют с молекулами клеточной поверхности ().Цитокиновые рецепторы, которые связаны с общей гамма-цепью (γc), такие как IL-15R, IL-2R и IL-21R, участвуют в развитии NK-клеток и эффекторной функции. В частности, IL-15 необходим для созревания и выживания NK-клеток, что согласуется с отсутствием циркулирующих NK-клеток у пациентов с SCID-X1 и у мышей, лишенных компонентов IL-15 или IL-15R (21). Цитокиновые рецепторы, связанные с адаптерным белком MyD88, также важны для созревания NK-клеток, а именно IL-1R у людей (22) и IL-18R у мышей (18).

рецепторов NK-клеток. NK-клетки экспрессируют множество рецепторов клеточной поверхности, которые можно сгруппировать в активирующие (зеленый), ингибирующие (красный), адгезионные (синий), цитокиновый (черный) и хемотаксический рецепторы (фиолетовый). В дополнение к рецепторам, специфичным для MHC класса I, другие рецепторы, ингибирующие NK-клетки, специфичные для лигандов, не являющихся MHC, также регулируют реактивность NK-клеток (78). Также показаны адаптерные молекулы, участвующие в сигнальном каскаде после задействования активирующих рецепторов (зеленый цвет). Список молекул клеточной поверхности, участвующих в регуляции функции NK-клеток мыши и человека, не является исчерпывающим.Если не указано иное (h, человек; m, мышь), рецепторы консервативны у обоих видов.

NK-клетки выполняют свои биологические функции различными способами. NK-клетки могут убивать различные клетки-мишени, включая инфицированные вирусом клетки и опухоли, в отсутствие антител. В случае вирусов рецептор, активирующий Ly49H мыши, распознает лиганд, кодируемый цитомегаловирусом (m157) (23, 24), и сообщалось, что NKp46 взаимодействует с гемагглютининами, полученными из вирусов гриппа и парагриппа (25).NK-клетки также способны обнаруживать клетки, покрытые антителами, через рецептор клеточной поверхности FcγRIIIA (CD16) и проявлять антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) и продукцию цитокинов. CD16 связан с полипептидами передачи сигнала CD3ζ и FcRγ, несущими мотивы активации на основе тирозина внутрицитоплазматического иммунорецептора (ITAM). Рецепторы естественной цитотоксичности (NKp46 / NCR1, NKp44 / NCR2 и NKp30 / NCR3) также являются мощными рецепторами активации, связанными с ITAM-несущими молекулами CD3ζ, FcRγ или DAP12 (26).У мышей молекула NK1.1 (Nkrp1c) на клетках CD3 ^– была полезным маркером для NK-клеток, но ее экспрессия ограничена только некоторыми линиями мышей. NKp46, по-видимому, является наиболее специфичным маркером NK-клеток среди видов млекопитающих, хотя отдельные подмножества Т-клеток также экспрессируют его (27). Накопление данных у людей и мышей также указывает на то, что клетки NCR ⁺ (NKp46 ⁺ у мышей, NKp46 ⁺ NKp44 ⁺ у людей), которые продуцируют IL-22, цитокин, который, как отмечалось, играет важную роль в иммунитете слизистых оболочек, обнаруживаются в слизистой оболочке кишечника.В отличие от настоящих NK-клеток, эти клетки слизистой оболочки NCR ⁺ IL-22 ⁺ экспрессируют фактор транскрипции RORγt, не являются цитотоксическими, не секретируют IFN-γ и не зависят от IL-15 в своем развитии ( 28, 29). Таким образом, NCR ⁺ IL-22 ⁺ четко отличаются от обычных подмножеств NK-клеток и, вероятно, происходят от другого клона, который может быть связан с клетками индуктора лимфоидной ткани (LTi), участвующими в образовании лимфоидной ткани (28, 29).В отличие от связанных с ITAM антиген-специфичных TCR и BCR, отсутствие которых приводит к полному блокированию развития Т- и В-клеток, соответственно, NK-клетки все еще развиваются в отсутствие молекул, несущих ITAM (30). Эти результаты подчеркивают избыточность путей развития NK-клеток и могут объяснить устойчивость этого компартмента лимфоидных клеток в большинстве случаев иммунодефицита.

Особенность нескольких рецепторов, активирующих NK-клетки, заключается в их способности обнаруживать собственные молекулы, индуцированные в условиях клеточного стресса (31).Это случай NKG2D, который взаимодействует с различными лигандами, которые экспрессируются на низких уровнях в большинстве тканей, но сверхэкспрессируются при инициировании клеточного дистресса, например, после инициации ответа на повреждение ДНК (32). Это также относится к B7-H6, лиганду для NKp30, который не был обнаружен в здоровых клетках, но экспрессируется на некоторых опухолевых клетках (33).

Новаторская работа показала, что NK-клетки могут обнаруживать отсутствие главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I («потерянное я»), ситуация, которая может возникнуть, когда клетки нарушены вирусной инфекцией или клеточной трансформацией (34).Это «потерянное самопознание» объясняется экспрессией на поверхности NK-клеток различных ингибиторных рецепторов класса I, специфичных для MHC, которые включают иммуноглобулин-подобные рецепторы (KIR) клеток-киллеров у людей, лектин-подобные молекулы Ly49 у мышей и CD94 / Гетеродимеры NKG2A у обоих видов (35, 36). Эти рецепторы MHC класса I принадлежат к большому семейству ингибирующих рецепторов, которые опосредуют свою функцию путем передачи сигналов через мотивы ингибирования на основе тирозина внутрицитоплазматического иммунорецептора (ITIM) (19).Таким образом, NK-клетки сохраняют здоровые клетки, которые экспрессируют собственные молекулы MHC класса I и небольшое количество индуцированных стрессом собственных молекул, тогда как они избирательно убивают клетки-мишени «в бедственном положении», которые подавляют молекулы MHC класса I и / или повышают стресс. -индуцированные собственные молекулы, такие как лиганды NKG2D (32).

Динамическая регуляция эффекторной функции NK-клеток. NK-клетки определяют плотность различных молекул клеточной поверхности, экспрессируемых на поверхности взаимодействующих клеток. Интеграция этих различных сигналов определяет качество и интенсивность ответа NK-клеток.NK-клетки сохраняют здоровые клетки, которые экспрессируют собственные молекулы MHC класса I и небольшое количество индуцированных стрессом собственных молекул ( A ), тогда как они избирательно убивают клетки-мишени «в беде», которые подавляют молекулы MHC класса I ( B ). ) или активируют индуцированные стрессом собственные молекулы ( C ). +, активирующие рецепторы; – ингибирующие рецепторы.

Почему NK-клетки не самореактивны?

Подобно Т-клеткам и В-клеткам, NK-клетки обладают потенциалом аутореактивности, даже если гены NK-рецепторов не подвергаются соматической диверсификации.Это связано с тем, что в некоторых NK-клетках отсутствуют ингибирующие рецепторы, которые связываются с молекулами MHC класса I хозяина (37, 38), или они экспрессируют активирующие рецепторы, которые распознают собственные лиганды, включая молекулы MHC (39–41). Эти паттерны экспрессии возникают из-за того, что набор рецепторов, которые отдельные NK-клетки начинают экспрессировать во время развития, в значительной степени случайный, и лиганды MHC, распознаваемые этими рецепторами, наследуются независимо от генов рецепторов (42). Следовательно, некоторые NK-клетки могут экспрессировать активирующие рецепторы для собственного лиганда, но не могут экспрессировать ингибирующие рецепторы для собственных молекул MHC.

Чтобы избежать аутореактивности, существует система обучения, посредством которой такие NK-клетки приобретают самотолерантность. Потенциально аутореактивные NK-клетки обычно не клонально удаляются, а вместо этого приобретают состояние гипореактивности к стимуляции через различные активирующие рецепторы. Таким образом, у нормальных мышей (38) или людей (43) часть NK-клеток не имеет рецепторов, подавляющих собственные MHC, и эти NK-клетки не реагируют на собственные клетки (). Похожая ситуация возникает у мышей или людей, у которых отсутствуют молекулы MHC класса I, где NK-клетки существуют в нормальном количестве, но не способны проявлять определяемый аутоиммунитет или убивать аутологичные клетки с дефицитом MHC класса I in vivo или in vitro (44–46) () .В обоих случаях NK-клетки не только не реагируют на собственные клетки, но также демонстрируют сниженные ответы на различные другие стимулы, включая опухолевые клетки с дефицитом MHC класса I или перекрестно связывающие антитела, специфичные для активации рецепторов (37, 38, 43, 44, 47). Для сравнения: посредством процесса обучения, зависящего от MHC, который некоторые исследователи называют лицензированием, NK-клетки, которые экспрессируют рецепторы собственного MHC у нормальных животных или людей, проявляют большую чувствительность к стимуляции, но их эффекторная функция в отношении соседних нормальных клеток ингибируется за счет задействования ингибирующие рецепторы, специфичные для МНС (37, 38, 48).Активно индуцируется ли NK-ответная реакция при столкновении с клетками, экспрессирующими лиганды MHC для этих NK-клеток (так называемое «вооружение»), или гипореактивность активно индуцируется встречами с нормальными клетками, у которых отсутствуют лиганды MHC и в то же время экспрессируются стимулирующие лиганды для этих NK-клеток. (так называемое «разоружение» или энергия) или и то, и другое остаются нерешенными проблемами (48). Молекулярные механизмы, управляющие реактивностью, также не установлены, за исключением того, что очевидно, что изменения в реактивности не коррелируют с изменениями экспрессии известных активирующих рецепторов (37, 38, 43, 44, 47, 49).

Настройка клеток NK. Схематизированы экспериментальные условия, в которых было показано, что NK-клетки приспосабливаются к окружающей среде. При отсутствии обнаружения MHC класса I, например, когда у NK-клеток отсутствуют родственные рецепторы MHC класса I ( A ) или у хозяев с дефицитом MHC класса I ( B ), NK-клетки гипореактивны в устойчивом состоянии. NK-клетки становятся «анергическими» из-за хронического взаимодействия различных активирующих рецепторов, таких как NKG2D ( C ), Ly49H у мышей ( D ) или KIR2DS1 у людей ( E ).NK-клетки могут быть обучены молекулами MHC класса I через их родственные ингибирующие рецепторы в транс ( F ) или в цис (не изображены) и примированы цитокинами ( G ).

Экспериментальные доказательства образования NK-клеток по MHC-независимому сценарию были получены с использованием мышей, сконструированных для экспрессии лигандов для активации рецепторов, таких как NKG2D () или Ly49H (50, 51) (). NK-клетки этих мышей толерантны к экспрессированному лиганду, но сохраняют экспрессию соответствующего рецептора.Точно так же у людей NK-клетки, экспрессирующие активирующий рецептор KIR2DS1, специфичный для аллотипа лимфоцитарного антигена человека (HLA) –C2, функциональны только тогда, когда происходят от доноров C1 / C2 или C1 / C1, но гипореактивны у доноров, гомозиготных по C2 (52). Это говорит о том, что в присутствии высоких уровней активирующих лигандов может иметь место отрицательный эффект настройки (53) ().

Возможно, что некоторые из механизмов, которые придают толерантность мышам с конститутивной экспрессией активирующих лигандов, такие же, как те, которые работают, когда NK-клетки не имеют рецепторов ингибитора для собственного MHC.Одним из возможных механизмов нарушения реактивности NK-клеток, которые не ингибируются молекулами MHC, является индукция анергического состояния, как это может происходить в аутореактивных Т-клетках и В-клетках. Другой причиной является неспособность этих NK-клеток пройти терминальное функциональное созревание, которое может зависеть от взаимодействий между MHC и ингибирующими рецепторами на NK-клетках. Другие возможности включают функцию ингибирующих рецепторов для лигандов, не являющихся MHC, или действие супрессорных клеток, но они вряд ли полностью объясняют эти результаты.

Каким бы ни был механизм (или механизмы), он должен учитывать наличие промежуточных состояний реагирования. NK-клетки различаются по количеству и сродству ингибирующих рецепторов, специфичных для собственного MHC, и было показано, что функциональный ответ NK-клеток на активирующие стимулы увеличивается соразмерно количеству различных ингибирующих рецепторов для собственного MHC, которые экспрессируются NK-клетками (53 , 54). Несмотря на более высокую чувствительность, NK-клетки с большим количеством ингибирующих рецепторов не являются аутореактивными, поскольку взаимодействие их ингибирующих рецепторов с молекулами MHC класса I на нормальных клетках подавляет их активность.Таким образом, NK-клетки, по-видимому, «настроены» таким образом, что большее ингибирование эффекторных клеток, которое сопровождает экспрессию большего количества ингибирующих рецепторов, уравновешивается большей потенциальной реактивностью NK-клеток.

Некоторые находки позволяют предположить, что чувствительность зрелых NK-клеток не является фиксированной, но может адаптироваться к изменяющейся среде in vivo. В отсутствие инфекции или другого заболевания перенос зрелых NK-клеток мышам без лигандов MHC привел к снижению чувствительности NK-клеток, что указывает на то, что столкновения с клетками, лишенными собственного MHC, которые обычно стимулируют эти клетки, вместо этого приводят их в движение. в гипореактивное состояние (55).Напротив, перенос NK-клеток от мышей с дефицитом MHC мышам MHC класса I ⁺ привел к повышенной реактивности, особенно тех NK-клеток с ингибиторным рецептором, специфичным для молекул MHC в новом хозяине, что указывает на то, что ингибирующее взаимодействие играет важную роль в повышение отзывчивости NK (55, 56). Следовательно, стойкая стимуляция без ингибирования приводит к гипореактивности NK-клеток, тогда как постоянная стимуляция в сочетании с соразмерным ингибированием приводит к реакции NK-клеток.Эти результаты предполагают, что настройка NK-клеток может происходить на протяжении всей жизни NK-клетки в стационарных условиях. У инфицированных животных, однако, гипореактивные NK-клетки преобразуются в состояние с более высокой реактивностью. Фактически, NK-клетки, лишенные собственных ингибиторных рецепторов, специфичных для MHC, играют более важную роль, чем другие NK-клетки в защитных реакциях на цитомегаловирусные инфекции у мышей (57), вероятно, отражая повышенную чувствительность, связанную с инфекцией, в сочетании с отсутствием взаимодействий с ингибирующими рецепторами.Взятые вместе, эти результаты предполагают, что в устойчивых условиях настройка NK-клеток позволяет тем NK-клеткам с рецепторами, ингибирующими собственный MHC, быстро устранять клетки с дефицитом MHC класса I, которые возникают в окружающей среде, тогда как NK-клетки с меньшим количеством таких рецепторов могут мобилизоваться воспалительными сигналами, сопровождающими инфекцию патогенными микроорганизмами (38, 48).

Можно ли манипулировать реактивностью NK-клеток при лечении рака?

Анализ реактивности NK-клеток раскрыл основы распознавания опухолевых клеток NK-клетками.У мышей NK-клетки отторгают опухоли, в которых отсутствует экспрессия MHC класса I или избыточная экспрессия лигандов NKG2D или костимулирующих сигналов, феномен, облегчающий опосредованный Т-клетками противоопухолевый иммунитет. NK-клетки защищают хозяина от сарком, индуцированных метилхолантреном, и от B-клеточной лимфомы, возникающей у мышей, лишенных перфорина и β2-микроглобулина (компонента MHC класса I) (58). У человека основными рецепторами, ответственными за распознавание опухоли NK-клетками, являются NKp46, NKp30, NKp44, DNAM1 и NKG2D. Опосредованный NK-клетками лизис опухолевых клеток включает несколько таких рецепторов, в зависимости от злокачественности.Были идентифицированы лиганды клеток-мишеней, распознаваемые некоторыми рецепторами, такими как MICA / B и ULBP для NKG2D, PVR и нектин-2 для DNAM-1 и B7-H6 для NKp30, которые в первую очередь экспрессируются или активируются на клетках. после активации, пролиферации или клеточной трансформации (31).

Несколько линий доказательств указывают на то, что NK-клетки или их рецепторы играют роль в иммунном надзоре за спонтанными опухолями, в том числе у людей. Действительно, в опухолях выработались механизмы, позволяющие избежать контроля со стороны NK-клеток, такие как выделение растворимых лигандов NKG2D, которые действуют как приманки для активирующего рецептора NKG2D на NK-клетках, явление, коррелирующее с плохим прогнозом при меланоме человека и раке простаты (58).Мыши, дефицитные по NKG2D, демонстрировали более высокую частоту или большую тяжесть опухолей в трансгенных моделях рака (59). Кроме того, исследования на мышах с дефицитом DNAM-1, NKp46 или NKG2D демонстрируют, что в присутствии NK-клеток опухоли изменяют экспрессию лигандов (60, 61). Кроме того, 11-летний период наблюдения показал, что низкая литическая активность NK связана с риском рака (62).

Эти знания побудили усилия использовать функции NK-клеток для улучшения лечения онкологических больных.Основополагающее наблюдение заключалось в демонстрации на людях того, что эффективность HSCT с истощенными Т-лимфоцитами для лечения пациентов с лейкемией намного выше, когда у реципиента отсутствует один гаплотип HLA по сравнению с донорским костным мозгом, а донорские NK-клетки присутствуют в инфузии клеток костного мозга. (63). Этот результат можно отнести к распознаванию «пропавшего себя» подмножеством донорских аллореактивных NK-клеток опухолевых клеток реципиента (64). Эти аллореактивные NK-клетки, которые экспрессируют KIR, которые не распознают молекулы MHC в реципиенте, сохраняются в течение нескольких лет и атакуют лейкемические клетки реципиента (реакция трансплантат против лейкемии), но не могут вызвать генерализованное заболевание трансплантат против хозяина, которое вызывает аллореактивные Т-клетки. может вызвать (65, 66).Было показано, что эти NK-клетки также способствуют приживлению трансплантата и предотвращают реакцию «трансплантат против хозяина» благодаря своей способности убивать антигенпрезентирующие клетки реципиента (63). На основе феномена образования и настройки можно ожидать, что эти аллореактивные NK-клетки будут гипореактивными. Потенциально, инфузия большого количества клеток CD34 ⁺ обеспечивает гемопоэтическое микроокружение преимущественно донорского типа, в котором процесс образования и настройки NK-клеток будет аналогичен процессу, происходящему у донора, и приведет к образованию NK-клеток, проявляющих аллореактивность против лейкозные бласты.Недавно была создана альтернатива манипулированию опосредованным NK-клетками распознаванием «отсутствующего себя» с использованием вливания человеческих моноклональных антител к KIR больным раком (67). Эти протоколы проходят испытания во второй фазе клинических испытаний при остром миелоидном лейкозе и множественной миеломе. Наконец, производство человеческих NK-клеток клинического уровня оказалось возможным, безопасным и многообещающим (65, 68), и в настоящее время проводятся комбинации адоптивного переноса NK-клеток с терапевтическими моноклональными антителами.Терапия, основанная на NK-клетках, должна извлекать пользу из более глубокого знания биораспределения NK-клеток и самонаведения in vivo, идентификации лигандов для некоторых активирующих рецепторов, а также NK-специфических иммуносупрессивных и иммуномодулирующих механизмов. Дополнительные исследования роли образования NK-клеток и несоответствия KIR могут также предоставить оптимальные стратегии использования NK-клеток в противоопухолевой терапии. Более того, генетические эпидемиологические исследования показали, что экспрессия определенных KIR и полиморфизмов MHC класса I связана с устойчивостью к нескольким микробам, таким как вирус иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) и гепатит C, или с восприимчивостью к различным аутоиммунным или воспалительным заболеваниям. синдромы (69).Поскольку KIR также может быть экспрессирован с помощью субнаборов Т-клеток, прямое отношение некоторых из этих данных к биологии NK-клеток еще не установлено. Тем не менее, эти исследования побуждают нас расширить разработку методов лечения, основанных на NK-клетках, на другие болезненные состояния, помимо рака, такие как инфекции и воспаления.

Помнят ли NK-клетки?

Иммунологическая память является отличительным признаком адаптивного иммунитета и характеризуется длительным сохранением клеток памяти, которые быстро подвергаются клональной экспансии и обладают усиленными эффекторными функциями в ответ на вторичный вызов.Хотя недавние открытия показали форму иммунологической памяти у низших организмов, у которых, как сообщается, отсутствует адаптивный иммунитет (70), обычно считается, что врожденная иммунная система не обладает способностью к иммунологической памяти. Более того, в случае зрелых NK-клеток их период полувыведения составляет 17 дней в стационарных условиях (71). Таким образом, недавние открытия, что по крайней мере некоторые зрелые NK-клетки или их потомство могут быть долгоживущими и что NK-клетки могут вызывать устойчивую реакцию отзыва, весьма поразительны.

Первое свидетельство памяти NK-клеток было обнаружено на модели гаптен-индуцированной контактной гиперчувствительности у мышей с дефицитом гена-2 (Rag-2), активирующих рекомбинацию, у которых отсутствуют Т- и В-клетки, но есть NK-клетки (72). Ранее считалось, что индуцированная гаптеном контактная гиперчувствительность (КГС) опосредуется только Т-клетками CD4 ⁺ после примирования мышей химическим гаптеном. Неожиданно, этот опосредованный NK-клетками ответ CHS у мышей с дефицитом Rag-2 мог быть обнаружен в течение по крайней мере месяца после химического прайминга, и этот ответ был гаптен-специфичным.Неожиданно было обнаружено, что эти NK-клетки «памяти» находятся только в печени, но не в селезенке, и были отмечены высокими уровнями экспрессии Thy1 на клеточной поверхности (72) и CXCR6 (73). Гаптен-специфический ответ CHS наблюдали у мышей, получавших адоптивный перенос NK-клеток печени от мышей, примированных гаптеном. Хотя блокирование рецептора NKG2D на NK-клетках ингибировало CHS, рецептор, ответственный за гаптен-специфическое распознавание, не был идентифицирован (72, 73).

Память NK-клеток также была продемонстрирована при вирусных инфекциях.У мышей C57BL / 6 активирующий рецептор Ly49H распознает гликопротеин m157 цитомегаловируса мыши (MCMV), который отображается на поверхности инфицированных клеток, что приводит к контролю инфекции, опосредованной NK-клетками (23, 24). После инфицирования MCMV эти NK-клетки Ly49H ⁺ подвергаются преимущественной экспансии (74). В экспериментах, в которых генетически маркированные зрелые NK-клетки Ly49H ⁺ были адоптивно перенесены реципиентам, инфицированным MCMV, популяция NK-клеток Ly49H ⁺ претерпела сокращение после контроля вируса, но NK-клетки памяти могли быть обнаружены у реципиента. чем через месяц (75).Подобно Т-лимфоцитам памяти, при рестимуляции эти NK-клетки памяти продемонстрировали улучшенную цитолитическую функцию и продукцию цитокинов по сравнению с «наивными» NK-клетками и были более эффективны в защите восприимчивых к MCMV неонатальных мышей от инфекции (75). NK-клетки памяти, выделенные от первого хозяина, могут быть адоптивно перенесены ко второму и даже третьему реципиенту и претерпевают последующие раунды пролиферации в ответ на инфекцию MCMV (75). Примерно через 2 месяца после первоначального заражения MCMV NK-клетки памяти можно было обнаружить практически во всех тканях и органах, включая селезенку, лимфатические узлы, печень, легкие и почки (75).Хотя пока нет уникального маркера памяти, эти долгоживущие NK-клетки, увеличенные с помощью MCMV, стабильно экспрессируют высокие уровни KLRG1, ингибиторного рецептора, который распознает кадгерины. Недавно NK-клетки памяти были описаны у мышей после контакта с гриппом, вирусом везикулярного стоматита (VSV) или ВИЧ-1 (73), хотя вирус-специфический рецептор NK для этих патогенов не был идентифицирован.

Кроме того, недавние исследования показали, что NK-клетки, активированные цитокинами in vitro и адоптивно перенесенные в наивных реципиентов, также могут сохраняться не менее месяца и обладают повышенной способностью продуцировать цитокины при рестимуляции (76).Эти данные свидетельствуют о том, что после активации зрелые NK-клетки могут приобретать стабильные наследуемые свойства, которые влияют на их поведение во время последующих инфекций. Таким образом, NK-клетки, кажется, помнят свое прошлое, и эта черта обычно считается возможной только для адаптивной иммунной системы. Появляющиеся доказательства иммунологической памяти и способности к самообновлению зрелых клеток в линии NK-клеток поднимают много вопросов: могут ли NK-клетки, размноженные в ответ на один патоген, обеспечить усиленную защиту от других неродственных патогенов, учитывая, что NK-клетки обладают множеством активирующих рецепторов а не единичный доминантный рецептор антигена, такой как В- и Т-клетки? Можно ли вакцинировать NK-клетки для усиления защиты хозяина? Какие рецепторные системы обеспечивают гаптен-специфическое распознавание NK-клетками? Какие эпигенетические изменения объясняют долголетие и усиление эффекторных функций, демонстрируемых NK-клетками памяти? Могут ли NK-клетки, такие как Т-клетки, дифференцироваться на функционально обособленные подмножества с регуляторной ролью в формировании величины и характера иммунного ответа на различные патогены? Ограничена ли память определенным подмножеством NK-клеток, о чем свидетельствует их очевидная локализация в печени, наблюдаемая в некоторых экспериментальных системах?

Врожденный или адаптивный иммунитет?

В дополнение к вышеупомянутым вопросам, которые они поднимают, недавние достижения в биологии NK-клеток, таким образом, показали, что NK-клетки обладают атрибутами как врожденного, так и адаптивного иммунитета.Эти данные также приводят к предположению, что общие врожденные и адаптивные особенности, вероятно, не уникальны для NK-клеток. Вдоль этой линии макрофаги быстро фагоцитируют CD47-дефицитные эритроциты, потому что ингибирующий рецептор макрофагов SIRP1α больше не задействован CD47, но макрофаги от CD47-дефицитных мышей не фагоцитируют CD47-дефицитные эритроциты (77), предполагая, что макрофаги адаптировались к отсутствие CD47 в их окружении. Следовательно, макрофаги могут претерпевать процесс образования посредством взаимодействия ITIM-несущего SIRP1α с его родственным лигандом CD47, напоминающего образование NK-клеток посредством взаимодействия с рецепторами, специфичными для MHC класса I.Таким образом, понятия, изначально ограниченные Т- и В-клетками, такие как различные репертуары рецепторов, образование и память, которые теперь применимы к NK-клеткам, побуждают исследовать, проявляют ли другие клетки врожденного иммунитета аналогичные свойства. Следовательно, определение «врожденного» как имеющего рецепторы, кодируемые зародышевой линией, по сравнению с «адаптивным» как имеющее перестроенные рецепторы, кажется достаточным, чтобы различать эти две ветви иммунитета.

Ссылки и примечания

79. Авторы приносят свои извинения за то, что не смогли процитировать все соответствующие статьи из-за нехватки места, и благодарят К.Beziers-Lafosse (CIML) за отличную графическую помощь, а также сотрудников их лабораторий за помощь и обсуждения. Е.В. и С.У. поддерживаются грантами от Agence Nationale de la Recherche (ANR), Ligue Nationale Contre le Cancer (Equipe Labellisée «La Ligue»), Fondation Del Duca и институциональными грантами от INSERM, CNRS и Université de la Méditerranée для CIML. Е.В. Ученый из Institut Universitaire de France, соучредитель и акционер Innate-Pharma. Д.H.R. поддерживается грантами NIH AI035021, AI039642 и CA093678 и является членом научного совета и акционером Innate-Pharma. ЯВЛЯЮСЬ. поддерживается грантами, присуждаемыми Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC), Ministero dell’Istruzione, dell’Università e della Ricerca и специальным проектом AIRC, и является соучредителем и акционером Innate-Pharma. M.A.C. поддерживается грантами Национального института рака США CA16058, CA95426 и CA68458. L.Z. поддерживается Institut National du Cancer, ANR, Ligue Nationale Contre le Cancer (Equipe Labellisée «La Ligue») и грантами ЕС INFLARE.L.L.L. является профессором Американского онкологического общества и поддерживается грантами NIH AI068129, CA095137 и AI066897, а также является консультантом Novo Nordisk и SBI Biotech Co., Ltd. W.M.Y. поддерживается Медицинским институтом Говарда Хьюза и грантами NIH AI33903, AI34385, AI51345 и AI5716.

Диагностика и лечение NK / T-клеточных лимфом | Журнал гематологии и онкологии

Идентификация, характеристика и анализ функций гена репрессирующего фактора NF-κB (NKRF) из Litopenaeus vannamei

Основные моменты

•

Идентификация первого гена NKRF беспозвоночных из Litopenaeus vannamei.

•

ЛьвовНКРФ оказывает усиливающее действие на активность креветок Дорсал и Смак.

•

LvNKRF способствует репликации вируса синдрома белых пятен in vivo.

Abstract

Факторы транскрипции семейства NF-κB регулируют широкий спектр биологических процессов, в частности иммунные ответы. Исследования на людях предполагают, что фактор репрессии NF-κB (NKRF) негативно регулирует активность NF-κB посредством прямого межбелкового взаимодействия.Однако функция NKRF до сих пор не изучалась за пределами млекопитающих. Текущее исследование идентифицировало ген NKRF (LvNKRF) тихоокеанской белой креветки, Litopenaeus vannamei , который показал гомологию с NKRFs насекомых, рыб и млекопитающих. LvNKRF был высоко экспрессирован в тканях кишечника, желудка и мышц и локализовался в ядре. LvNKRF может взаимодействовать как с Dorsal, так и с Relish, двумя членами семейства креветок NF-κB. Интересно, что несмотря на сходную структуру белка с человеческим NKRF, LvNKRF не обнаруживал ингибирующего, а вместо этого усиливающего действия на активность дорсального и Relish, что противоречило таковым у NKRF млекопитающих.Экспрессия LvNKRF не могла быть индуцирована грамположительными и -отрицательными бактериями и иммуностимуляторами липополисахаридом (LPS) и поли (I: C), но была значительно повышена после инфицирования вирусом синдрома белых пятен (WSSV). Подавление LvNKRF значительно снизило смертность креветок, вызванную инфекцией WSSV, и подавило количество копий WSSV и экспрессию структурного гена WSSV в тканях. Они предполагают, что LvNKRF может способствовать инфицированию креветок WSSV, что может быть дополнительной стратегией для WSSV по захвату пути NF-κB хозяина, чтобы способствовать его собственной репликации.Настоящее исследование может предоставить ценный контекст для дальнейшего изучения эволюционного происхождения NKRFs и облегчить изучение регуляторных механизмов путей NF-κB у беспозвоночных.

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2017 Elsevier Ltd. Все права защищены.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Радиочастотные (RF) герметики и нагреватели (80-107) | NIOSH

декабрь 1979 года

DHHS (NIOSH) Номер публикации 80-107

Текущий бюллетень разведки 33

Национальный институт безопасности и гигиены труда (NIOSH) и Управление по охране труда (OSHA) обеспокоены потенциальной опасностью для здоровья рабочих, подвергающихся воздействию радиочастотной (РЧ) энергии, излучаемой радиочастотными диэлектрическими нагревателями (более известными как радиочастотные герметики и герметики). обогреватели).Радиочастотная энергия представляет собой неионизирующее электромагнитное излучение, и ее не следует путать с рентгеновскими лучами и другим ионизирующим излучением. Радиочастотная энергия, когда она поглощается в достаточном количестве рабочими, может вызывать неблагоприятные тепловые эффекты в результате нагрева глубоких тканей тела, которые могут включать потенциально разрушительные изменения в клетках. Поглощение радиочастотной энергии также может приводить к «нетепловым» эффектам на клетки или ткань, которые могут происходить без измеримого повышения температуры ткани или тела. Сообщается, что «нетепловые» эффекты возникают при уровнях воздействия ниже, чем те, которые вызывают тепловые эффекты.Хотя ученые не полностью согласны относительно важности сообщений о «нетепловых» эффектах, наблюдаемых у лабораторных животных, NIOSH считает, что существует достаточно доказательств таких эффектов, чтобы вызывать опасения по поводу воздействия на человека. NIOSH и OSHA рекомендуют принять меры предосторожности, чтобы свести к минимуму риск для рабочих из-за неоправданного воздействия радиочастотной энергии. В разделе V приложения к этому бюллетеню перечислены технические средства контроля, такие как экранирование, и другие немедленные действия, которые необходимо предпринять.Кроме того, NIOSH и OSHA издают этот бюллетень, чтобы предупредить работодателей и работников о возможности чрезмерного воздействия на рабочих радиочастотной энергии от радиочастотных герметиков и обогревателей, а также рекомендовать технологии контроля, которые могут предотвратить необоснованное облучение.

Рабочие, находящиеся рядом с радиочастотными герметиками, могут не знать о своем воздействии радиочастотного излучения, поскольку радиочастотная энергия от герметиков и нагревателей может глубоко проникать в тело, не активируя тепловые датчики, расположенные в коже. Может существовать ложное ощущение безопасности сотрудников; во многих случаях воздействие радиочастотной энергии на рабочих могло быть неправильно оценено.Это произошло, в основном, из-за сложных проблем измерения и, следовательно, неправильного применения инструментов, доступных для мониторинга уровней радиочастотной энергии. Недавно были разработаны инструменты мониторинга, которые облегчают точное измерение воздействия на рабочих. Федеральные исследовательские группы, оснащенные этими новыми приборами, обнаружили чрезмерное воздействие радиочастотной энергии на рабочих.

NIOSH ищет дополнительную информацию о побочных эффектах радиочастотной энергии и эффективных технологиях управления.Институт был бы признателен за получение информации о неблагоприятных последствиях для здоровья рабочих, которые могут быть связаны с их воздействием радиочастотной энергии на рабочем месте, а также информацию о методах модернизации существующих радиочастотных уплотнителей и обогревателей с целью ограничения выбросов радиочастотной энергии. NIOSH и OSHA просят производителей, дистрибьюторов и пользователей радиочастотных уплотнителей и обогревателей передавать информацию, содержащуюся в этом бюллетене, своим клиентам и сотрудникам, а профессиональные сообщества, торговые ассоциации и союзы сообщают об этом своим членам.

Фон

использовались более 30 лет, но нет надежных, задокументированных оценок количества единиц, используемых в настоящее время, или числа рабочих, работающих с уплотнителями RF. Однако, как правило, считается, что количество используемых RF-уплотнителей и нагревателей составляет приблизительно 20 000, и что на этих установках работает от 30 000 до 40 000 рабочих. Список компаний, которые, как предполагается, производят радиочастотные герметики и / или обогреватели, приведен в Разделе I прилагаемого Приложения.

RF используются для нагрева, плавления или отверждения таких материалов, как пластик, резина или клей. Конкретные области применения включают: 1) производство многих пластмассовых изделий, таких как игрушки, виниловые папки с отрывными листами, дождевик, водонепроницаемые контейнеры, чехлы для мебели и упаковочные материалы; 2) процессы ламинирования и облицовки древесины, включая закрепление клея; 3) операции тиснения и сушки в текстильной, бумажной, пластмассовой и кожевенной промышленности; и 4) отверждение различных материалов, включая пластифицированный поливинилхлорид, древесные смолы, пенополиуретан, бетонные вяжущие материалы, резиновые шины и эпоксидные смолы.Обширный перечень профессий, связанных с использованием радиочастотных герметиков и обогревателей, представлен в Разделе II прилагаемого Приложения.

Эксперименты на животных предполагают, что потенциальные последствия поглощения чрезмерного количества радиочастотной энергии могут включать изменения в: глазах, центральной нервной системе, условнорефлекторном поведении, частоте сердечных сокращений, химическом составе крови и иммунологической системе. Сообщалось также о воздействии на репродуктивную функцию и развитие потомства самок, подвергшихся воздействию во время беременности.

Как упоминалось ранее, во многих промышленных условиях может существовать ложное представление о безопасности сотрудников, поскольку воздействие радиочастотной энергии на рабочих могло быть неправильно оценено. Недавняя разработка инструментов мониторинга, которые облегчают точное измерение воздействия радиочастотной энергии на рабочих, позволила провести серию исследований на рабочих местах, где используются радиочастотные герметики и обогреватели. Результаты исследования NIOSH показывают, что большинство опрошенных рабочих подвергались воздействию радиочастотной энергии на уровнях, превышающих значения, указанные OSHA. ¹ Уровень радиочастотной энергии в непосредственной близости от рабочего был в десять раз выше значений, указанных OSHA. ^1,2 Список производителей приборов, подходящих для измерения радиочастотной энергии, представлен в Разделе III прилагаемого Приложения.

В этом бюллетене представлен обзор потенциальных неблагоприятных последствий для здоровья, связанных с использованием радиочастотных диэлектрических нагревателей. Приложение содержит техническую информацию, которая поможет исследовательскому, инженерному и производственному персоналу оценить эту потенциальную опасность, а также инициировать соответствующие модификации и меры контроля для предотвращения необоснованного воздействия на рабочих.

Биологические эффекты энергии

Избыточное количество радиочастотной энергии, поглощаемой рабочими, может вызвать неблагоприятные тепловые эффекты в результате нагрева глубоких тканей тела. Эти тепловые эффекты могут включать потенциально разрушительные изменения в клетках, вызванные локальным повышением температуры ткани. Ученые, участвовавшие в этой работе, в целом согласились с тем, что облучение людей уровнями радиочастотной энергии на уровне плотности мощности в дальней зоне 10 мВт / см или выше ² (см. Раздел IV.C прилагаемого Приложения) может вызвать чистое увеличение температуры тканей или тела, и следует избегать воздействия на эти значения или выше. ³ В дальней зоне плотность мощности 10 мВт / см ² эквивалентна среднему квадрату напряженности электрического поля 40000 вольт ² / метр ² или среднеквадрату напряженности магнитного поля 0,25 ампера ² / метр. ² Поскольку тепловые датчики поверхности тела, расположенные в коже, не активируются, когда радиочастотная энергия поглощается глубоко в тканях тела, работники радиочастотного герметика могут не осознавать, что они поглощают радиочастотную энергию.

Поглощение радиочастотной энергии может также вызывать «нетепловые» эффекты на клетки или ткань, которые могут происходить без измеримого повышения температуры ткани или тела.Сообщается, что «нетепловые» эффекты возникают в результате воздействия радиочастотной энергии при более низкой напряженности поля, чем та, которая необходима для возникновения тепловых эффектов. ^4,5 Хотя ученые не полностью согласны относительно важности сообщений о «нетепловых» эффектах, наблюдаемых у лабораторных животных, NIOSH считает, что существует достаточно документации о таких эффектах, чтобы вызывать беспокойство.

Для частот излучения, аналогичных тем, которые обычно используются с радиочастотными герметиками и нагревателями, зарегистрированные наблюдения при относительно низких уровнях энергии у лабораторных крыс или кроликов включали изменения в: электроэнцефалографических (ЭЭГ) записях электрической активности мозга, ⁶ условно-рефлекторном поведении ^6,7 химический состав крови, ⁶ эндокринная (гормональная) система, ^6,8 и иммунологическая (защита от инфекций) система. ^6,9 Подробности этих экспериментов кратко изложены в Разделе IV.E прилагаемого Приложения. Для частот, на которых проводились эти наблюдения, скорость поглощения энергии у человека намного выше, чем у лабораторных животных. ¹⁰ Таким образом, биологические эффекты, наблюдаемые у лабораторных животных , могут иметь место у людей при уровнях воздействия даже ниже, чем те, о которых сообщалось для животных.

Другие неблагоприятные последствия для здоровья глаз, частоты сердечных сокращений и центральной нервной системы наблюдались у лабораторных животных, подвергшихся воздействию электромагнитной энергии на более высоких частотах в микроволновом диапазоне электромагнитного спектра (см. Раздел IV.А прилагаемого Приложения). Неизвестно, в какой степени эти последние эффекты могут быть вызваны поглощением энергии на более низких частотах, используемых радиочастотными герметиками.

Нет убедительных доказательств того, что радиочастотная энергия может вызывать рак у человека. ⁴ В отчетах описаны хромосомные аномалии в клетках животных и человека, культивируемых в лаборатории после воздействия радиочастотной энергии. ^11,12 Однако актуальность таких исследований для людей неизвестна и должна быть определена путем дополнительных исследований.

Имеются сообщения, свидетельствующие о связи между воздействием радиочастотного излучения и нарушением репродуктивной функции животных и людей. В этих отчетах, в первую очередь из Восточной Европы и Советского Союза, перечислены различные эффекты репродуктивной системы и развития, возникающие в результате профессионального воздействия на рабочих и экспериментального воздействия на лабораторных животных электромагнитной энергии на частотах в радиочастотном и микроволновом диапазонах. Сообщенные эффекты от воздействия на женщин полей с относительно высокой интенсивностью радиочастотной и микроволновой энергии включают изменения в менструальном цикле, увеличение частоты выкидышей и снижение лактации у кормящих матерей. ¹³ Задержка развития плода и увеличение врожденных аномалий были отмечены среди потомков, подвергшихся воздействию. ¹³ Лабораторные исследования показали, что воздействие радиочастотной энергии на беременных крыс (на уровнях, которые считались относительно высокими) приводило к многочисленным порокам развития плода, включая аномалии центральной нервной системы, деформации глаз, волчью пасть и деформацию хвоста. ¹⁴

Имеется сообщение об изменениях в сперматогенезе (производстве мужских половых клеток в яичках) среди рабочих, подвергшихся воздействию неионизирующей электромагнитной энергии. ¹⁵ Репродуктивные эффекты у самцов экспериментальных животных, включая повреждение яичек, ослабленное или мертворожденное потомство и изменения в сперматогенезе, как сообщается, связаны с воздействием электромагнитной энергии на микроволновых частотах. ^16,17 О подобных исследованиях не сообщалось для низкочастотных радиочастотных герметиков и нагревателей.

NIOSH показывают, что подавляющее большинство рабочих, использующих радиочастотное уплотнение и нагревательное оборудование, – женщины детородного возраста. ¹⁸ NIOSH начинает эпидемиологическое исследование потенциальных репродуктивных эффектов среди операторов радиочастотных силеров и проводит лабораторные исследования для изучения возможности того, что тератогенные эффекты (пороки развития) у животных могут быть результатом воздействия радиочастотного излучения.

Настоящий стандарт воздействия на рабочем месте

Стандарт радиационной защиты Управления по охране труда и здоровья для профессионального облучения радиочастотным и микроволновым излучением (29 CFR 1910.97) применяется к частотам 10–100 000 МГц.Он устанавливает в качестве предела для профессионального облучения максимальную плотность мощности 10 мВт / см ² , усредненную за любой возможный 6-минутный период. ¹⁹ В дальних полях плотность мощности 10 мВт / см ² эквивалентна среднему квадрату напряженности электрического поля 40000 вольт ² / метр ² или среднеквадрату напряженности магнитного поля 0,25 ампера ² / метр ² . OSHA в настоящее время применяет оба этих среднеквадратичных значения напряженности поля, усредненных по любому 0.1-часовой период в качестве пределов воздействия радиочастотной энергии в соответствии с профессиональным стандартом неионизирующего излучения (29 CFR 1910.97).

Существующие национальные стандарты здравоохранения в отношении радиочастотной энергии основаны на данных о тепловых эффектах, возникающих в результате поглощения телом радиочастотной энергии и последующего нагревания глубоких тканей тела. Однако в последние годы после разработки существующих национальных стандартов возросла озабоченность по поводу сообщений о «нетепловых» эффектах, которые могут возникать при уровнях воздействия более низких, чем те, которые вызывают измеримые тепловые эффекты.

Рекомендации NIOSH

NIOSH и OSHA обеспокоены потенциальной опасностью для здоровья рабочих, подвергающихся стандартному воздействию радиочастотной энергии, излучаемой радиочастотными герметиками и нагревателями. Настоящий Федерал был получен с использованием данных, главным образом, из экспериментов с животными на микроволновых частотах, а не на более низких радиочастотах. Стандарт был предназначен для предотвращения тепловых эффектов.

Степень, в которой биологические эффекты, связанные с поглощением радиочастотной энергии животными, отражают профессиональную опасность для рабочих, полностью не известна.Есть неточности в экстраполяции экспериментальных результатов с животных на людей и на частоты, отличные от тех, которые использовались в экспериментах. Эти проблемы усугубляются трудностью правильного измерения воздействия радиочастотной энергии в ближнем поле, которая была решена только недавно. NIOSH рекомендует, чтобы будущие исследовательские проекты, связанные с радиочастотной энергией, отвечали требованиям для: 1) лучшей дозиметрии воздействия и количественной оценки биологических результатов, 2) использования адекватных экспериментальных средств контроля и 3) единообразного представления экспериментальных параметров и результатов.

Хотя ученые не полностью согласны с интерпретацией имеющихся данных о биологических эффектах, NIOSH полагает, что существует достаточно доказательств таких эффектов, чтобы вызывать опасения по поводу воздействия на человека. NIOSH и OSHA рекомендуют принять меры предосторожности, перечисленные в Разделе V прилагаемого Приложения, для защиты рабочих от неоправданного воздействия радиочастотной энергии.

[подпись]
Энтони Роббинс, доктор медицины
Директор
Национальный институт профессиональной безопасности
Безопасность и здоровье

[подпись]
Эула Бингхэм, Ph.D.
Помощник министра труда
Охрана труда
Администрация

Список литературы

2. Conover, D.L., W.H. Парр, Э. Сенсинтаффер и У. Мюррей-младший: Измерение напряженности электрического и магнитного поля от промышленных источников энергии с радиочастотой (15-40,68 МГц). В «Биологические эффекты электромагнитных волн: избранные документы ежегодного собрания USNC / URSI » (Боулдер, Ко, 20–23 октября 1975 г.). Джонсон и М.Л. Шор, ред., Департамент здравоохранения, образования и социального обеспечения, Служба общественного здравоохранения, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, Бюро радиологического здоровья, публикация DHEW (FDA) № 77-8011, 2 : 356-362 (1976). ).
3. Коновер, Д.Л .: Воздействие на персонал РФ (10-40 МГц). Проблемы промышленной гигиены, Конференция Американской ассоциации промышленной гигиены, Новый Орлеан, штат Луизиана, 22–27 мая 1977 г., 10 стр. (1977).
4. Шван, Х.П .: Исследование микроволновых биоэффектов: исторические перспективы продуктивных подходов. J. Microwave Power 14 (л): 1-5 (1979).
5. Национальный институт безопасности и гигиены труда (NIOSH): Технический отчет NIOSH, Канцерогенные свойства ионизирующего и неионизирующего излучения, Том II – Микроволновое и радиочастотное излучение . Департамент здравоохранения, образования и социального обеспечения, Служба общественного здравоохранения, Центр по контролю за заболеваниями, Национальный институт охраны труда, Публикация DHEW (NIOSH) № 78-134 (март 1978 г.).
6. Додж, К.Х. и З. Глейзер: Тенденции в исследованиях биоэффектов электромагнитного излучения и связанные с ними аспекты гигиены труда. J. Microwave Power 12, (4): 319-334 (1977).
7. Сердюк, А.М .: Биологический эффект низкоинтенсивных полей сверхвысоких частот. Врач. Дело 11 : 108-111 (1969).
8. Лобанова Е.А., Лобанова А.В. Гончарова: Исследование условнорефлекторной деятельности животных (крысы-альбиносы), подвергшихся воздействию ультракоротких и коротких радиоволн. гиг.Тр. Проф. Забол. 15 (1): 29-33 (1971).
9. Демокидова, Н.К .: Влияние радиоволн на рост животных. В Биологические эффекты радиочастотных электромагнитных полей , З.В. Гордон, изд., Арлингтон, Вирджиния, Служба исследования совместных публикаций США № 63321, стр. 237-242 (1974).
10. Волкова А.П., Петров П.О. Фукалова: Изменение некоторых защитных реакций организма под воздействием УВ в экспериментальных и производственных условиях. В Биологические эффекты радиочастотных электромагнитных полей , Z.V. Gordon, ed., Arlington, VA, U.S. Joint Publications Research Service No. 63321, pp. 168-174 (1974).
11. Durney, C.H., C.C. Джонсон, П. Барбер, Х. Массуди, М.Ф. Искардер и Дж.К. Митчелл: Справочник по дозиметрии радиочастотного излучения , 2-е изд., SAM-TR-78-22. База ВВС Брукс, Техас, Департамент ВВС, Командование систем ВВС, Аэрокосмический медицинский отдел, Школа аэрокосмической медицины, 141 стр. (1978).
12. Хеллер, Дж. Х .: клеточные эффекты микроволнового излучения.In «Биологические эффекты и последствия микроволнового излучения для здоровья: материалы симпозиума » (Ричмонд, Вирджиния, 17-19 сентября 1969 г.). С.Ф. Клири, изд., Департамент здравоохранения, образования и социального обеспечения, Служба общественного здравоохранения, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, Бюро радиологического здоровья, Отдел биологических эффектов (BRH / DBE 70-2), стр. 116-121 (1970).
13. Mickey, G.H., J.H. Хеллер и Э. Снайдер: Нетепловые опасности воздействия радиочастотных полей – Заключительный отчет. Институт Новой Англии, Риджфилд, Калифорния., 46 с. (1975). Представлен в Управление военно-морского флота Управления военно-морских исследований по контракту № N00014-69-C-0175.
14. Марха К., Дж. Мусил и Х. Туха: Электромагнитные поля и среда обитания. State Health Publishing House, Прага, Чехословакия, 1968. Перевод SBN

Приложение

1. Производители радиочастотного герметизирующего и / или нагревательного оборудования
2. Профессии, которые могут включать использование радиочастотного герметизирующего и нагревательного оборудования
3. Производители приборов для измерения радиочастотной энергии в ближнем поле
4. Вспомогательная техническая информация
   1. Электромагнитное излучение
   2. RF Уплотнители и нагреватели
   3. Измерения полей радиочастотной энергии
   4. Поглощение радиочастотной энергии
   5. Биологические эффекты поглощенной радиочастотной энергии
5. Рекомендации по контролю за опасностями Ссылки

И.Производители радиочастотного герметизирующего и / или нагревательного оборудования

Упоминание названия компании или продукта не означает одобрения Национальным институтом безопасности и гигиены труда или Управлением по охране труда.

* Этот список является полным и точным, насколько это известно NIOSH; однако могут быть другие производители этого оборудования, о которых Институт не знает. [вернуться к тексту]

II.Профессии, которые могут включать использование радиочастотного герметизирующего и нагревательного оборудования

Автомобильные рабочие: Сушка панелей обивки основания, тиснение пяток на коврах, термосвариваемые панели внутренней отделки кузова, термосвариваемые крыши и виниловые крыши, термосвариваемые обивочные покрытия для сидений и спинок.

Мебель и деревообработчик: монтаж настилов, ламинирование дверей, изготовление стоек и стропил, изготовление ДВП, клееных балок, приклеивание кромок пиломатериалов, ямочный ремонт фанерных панелей, приклеивание шарфов фанеры или ДСП, ламинирование лыж, приклеивание фанерных панелей.

Работники стекловолокна: Сушка и отверждение калибровки машинных пакетов, сушка покрытий на непрерывно движущихся нитях, сушка стекловолокна на формовочных трубках, сушка ровничных упаковок.

Работники бумажного производства: Коррекция профиля влажности на непрерывно движущихся полотнах, сушка полимерных покрытий, сушка пакетов из скрученного шпагата, склеивание бумаги, нагревание покрытия на непрерывных полотнах.

Рабочие по термосвариванию пластмасс, участвующие в производстве / изготовлении: Ацетатных крышек для коробок, рекламных новинок, крышек для бытовых приборов, фартуков, детских штанов, пляжных мячей, ремней и подтяжек, блистерных упаковок, обложек для книг, накидок, платежных карт, чековой книжки чехлы, трансформируемые вершины, подушки, пакеты для пеленок, витрины, электрические одеяла, пакеты с едой, перьевые ручки, сумки для одежды, противогазы, защитные очки (промышленные), сумки, чехлы для шляп, учетные карточки, абажуры, емкости с жидкостью, багаж, чехлы для машин , наматрасники, мягкие картонные коробки, кислородные палатки, пакеты, фармацевтические препараты, наволочки, пакеты для подушек, пластиковые перчатки, подкладки для бассейнов, защитная одежда, мешки для ракеток, дождевик, сумки для холодильников, сумки для обуви, обувь, занавески для душа, клипсы, коврики для брызг, губчатые основы, спортивное снаряжение, пакетики для табака, игрушки, дорожные чемоданы, зонты, кошельки, водонепроницаемые контейнеры, крышки клемм для проводов.

Сотрудники, работающие с радиочастотами и микроволновыми печами: Реклама – Таблички с дисплеями для газов, возбуждаемых радиочастотами.
Керамика – Сушка керамических изделий.
Химический – Активация химических реакций.
Электроника – Старение и испытания трубок.
Laser – Газовые лазеры с ВЧ-возбуждением.
Медицинские – Диатермия и (экспериментальная) терапия рака.
Научное оборудование – Низкотемпературное озоление образцов.
Сварка – Сварка с высокочастотной стабилизацией.

Рабочие по производству резиновых изделий: Сушка латексной пены, гелеобразование латексной пены, предварительный нагрев перед отверждением латексной пены, предварительный нагрев перед формованием.

Текстильщики: Сушка непрерывных полотен, пропитанной пряжи или пряжи с покрытием, пакетов для пирожных из искусственного шелка, сшивающих покрытий и намотанных пакетов.

III. Производители приборов для измерения радиочастотной энергии в ближнем поле

Упоминание названия компании или продукта не означает одобрения Национальным институтом безопасности и гигиены труда или Управлением по охране труда.

General Microwave Corp.
Фармингдейл, Лонг-Айленд, Нью-Йорк

• Только для электрического поля :
  • Высокочувствительный изотропный измеритель радиационной опасности, модель 4

Instruments for Industry, Inc.
Фармингдейл, Лонг-Айленд, Нью-Йорк

• Только для электрического поля :
  • Устройство контроля радиационной опасности электрического поля, модель RHM-2

Narda Corporation
Плейнвью, Лонг-Айленд, Нью-Йорк

• Для электрических магнитных полей и :
  • Датчик напряженности электрического поля, модель 8644
  • Датчики напряженности магнитного поля, модель 8635 или 8633
  • Счетчики, модель 8619 или модель 1816

* Этот список является полным и точным, насколько это известно NIOSH: & mbsp, однако, могут быть другие производители сопоставимого оборудования, о которых Институту не известно. [вернуться к тексту]

IV. Дополнительная техническая информация

A. Электромагнитное излучение

Радиочастотная энергия (или радиочастотное излучение) является частью спектра электромагнитной энергии. Что касается энергии, излучаемой радиочастотным герметиком или нагревателем, электромагнитное излучение можно рассматривать как серию волн энергии, распространяющихся в пространстве и состоящих из колеблющихся электрических и магнитных полей. Эти волны создаются движущимися электрическими зарядами и могут иметь естественное происхождение (например,грамм. солнце) или может иметь человеческое происхождение (например, производиться электронными устройствами, такими как диатермические машины, микроволновые печи, теле- и радиопередатчики). Волна электромагнитной энергии частично характеризуется:

1. напряженности электрического и магнитного полей – напряженности электромагнитных сил
2. частота колебаний – количество полных колебаний в секунду волны
3. длина волны – расстояние между двумя последовательными пиками волны

Длина волны и частота обратно пропорциональны; по мере увеличения длины волны частота уменьшается.Энергетическое содержание электромагнитного излучения зависит от длины волны; волны с большей длиной волны (более низкой частотой) содержат меньше энергии на квант ^* единиц. Графическое изображение спектра электромагнитного излучения представлено на рисунке 1.

Частота (Герц, цикл в секунду)

Рисунок 1. Электромагнитный спектр

* Электромагнитную энергию можно также описать как дискретные частицы (или кванты) энергии. [вернуться к тексту]

Электромагнитная энергия, излучаемая источником, распространяется в пространстве до тех пор, пока она не будет поглощена, отражена, передана и / или дифрагирована объектами на своем пути. Когда электромагнитное излучение содержит достаточно энергии (на частотах, намного превышающих радиочастоты), оно может ионизировать атомы материала, поглощающего энергию (т. Е. Вытеснять электроны из атомов поглощающего материала). Излучение с достаточной энергией, чтобы вызвать ионизацию молекул в биологической ткани, часто называют ионизирующим излучением, тогда как излучение с недостаточной энергией, чтобы вызвать этот эффект, называют неионизирующим излучением.Ионизирующие и неионизирующие области электромагнитного спектра показаны на рисунке 1. Хотя неионизирующее излучение, поглощаемое биологической тканью, не способно ионизировать атомы или молекулы, оно, тем не менее, может вызывать изменения в колебательной и вращательной энергии биологических молекул, что приводит к изменениям. в молекулах или диссипация энергии в виде тепла.

B. RF Герметики и нагреватели

Радиочастотные герметики и нагреватели генерируют с помощью электронных схем колебательные поля электрической и магнитной энергии.Радиочастотные герметики обычно работают в диапазоне частот от 10 до 70 МГц (мегагерц (МГц) – это один миллион циклов в секунду), хотя большинство герметиков работают на номинальных частотах от 13 до 40 МГц. Некоторые станки для склеивания древесины работают на частотах от 3 до 6 МГц, а некоторые радиочастотные нагреватели, используемые для пластмасс, работают на частотах до 300-400 МГц. Радиочастотная электромагнитная энергия, излучаемая радиочастотным герметиком или нагревателем, считается неионизирующим излучением в силу его частоты и энергии кванта.Неэкранированные или неправильно экранированные радиочастотные герметики или нагреватели могут вызывать утечку паразитной радиочастотной энергии. Были произведены измерения напряженности электрического и магнитного полей в непосредственной близости от оператора до 2000 вольт / метр и 10 ампер / метр соответственно. ^1,2 В большинстве обследованных радиочастотных устройств утечка паразитной энергии превышала 200 вольт / метр или 0,5 ампер / метр. ² Измерения напряженности электрического и магнитного полей будут рассмотрены ниже.

C. Измерения энергетических полей RF

При измерении энергии РЧ необходимо учитывать расстояния от источника РЧ, на котором проводятся измерения.Для целей данного бюллетеня расстояния от источника РЧ можно разделить на дальнее или ближнее поле. Дальнее поле включает все расстояния от источника РЧ, которые примерно в десять раз превышают длину волны. Длины волн, соответствующие частотам, используемым радиочастотными герметиками и нагревателями, могут находиться в диапазоне от примерно одного метра до нескольких сотен метров. Частота 27 МГц, которая типична для многих радиочастотных обогревателей, соответствует номинальной длине волны около 11 метров. В дальней зоне количество энергии, связанной с типичной волной, может быть выражено как плотность мощности (в единицах милливатт на квадратный сантиметр, мВт / см ² ).Значение плотности мощности в дальней зоне может быть измерено с помощью монитора плотности мощности или может быть вычислено путем измерения напряженности либо электрического поля, либо только магнитного поля. Напряженность среднего электрического поля выражается в вольтах на метр, а среднеквадратичное значение выражается в вольтах. ² / метр ² ; Напряженность среднего магнитного поля выражается в амперах на метр, а среднеквадратичное значение выражается в амперах. ² / метр ² .

Ближнее поле включает расстояния от источника радиочастоты менее примерно пяти длин волн, включая непосредственную близость к радиочастотному устройству, где происходит большая часть воздействия радиочастотной энергии на рабочих. В ближнем поле электромагнитные волны имеют другие характеристики, чем в дальнем поле. Кроме того, на рабочем месте рядом с радиочастотным герметиком или обогревателем электромагнитное поле обычно неоднородно, а энергетическое поле, падающее на рабочего, является сложным и зависит от многих факторов.Мониторы плотности мощности, разработанные для использования в дальней зоне, вероятно, будут давать чрезвычайно неточные измерения в ближней зоне. Кроме того, в ближнем поле, в отличие от дальнего поля, нет простой математической эквивалентности между значениями плотности мощности и измерениями напряженности электрического или магнитного поля.

В прошлом значения плотности мощности в дальней зоне использовались в различных руководствах и рекомендациях по общественному здравоохранению в отношении пределов воздействия, в том числе предназначенных для профессиональных условий.Однако значение плотности мощности, которое можно измерить или рассчитать для условий дальнего поля, не подходит для количественной оценки воздействия в ближнем поле рабочего, работающего с радиочастотным герметиком или аналогичным устройством. В ближнем поле измерения электрического и магнитного полей необходимы для правильной характеристики условий воздействия на рабочих. В настоящее время коммерчески доступны инструменты для измерения электрических магнитных полей и в ближней зоне. Пользователи должны тщательно следовать инструкциям производителей приборов, чтобы избежать повреждения чувствительных датчиков прибора.Список производителей этих инструментов представлен в Разделе III Приложения.

D. Поглощение радиочастотной энергии

Когда радиочастотная энергия, распространяющаяся в космосе, встречает объект, она может отражаться от объекта (принудительно менять направление движения), передаваться через объект или поглощаться объектом. Степень отражения и / или поглощения РЧ-энергии зависит от частоты РЧ-энергии, а также от формы, размера и диэлектрических свойств объекта, а также от его ориентации относительно падающей РЧ-энергии.

Люди могут поглощать радиочастотную энергию на частотах, используемых большинством радиочастотных герметиков и обогревателей. У рабочих, не контактирующих с электрическим заземлением, самые высокие показатели поглощения при облучении всего тела могут наблюдаться на частотах от 60 до 100 МГц с пиком примерно на 80 МГц. ^3,4 Эти частоты с высокой степенью поглощения очень близки к частотам, используемым большинством герметиков и нагревателей. Следовательно, рабочие, находящиеся рядом с радиочастотными уплотнителями и нагревателями, могут поглощать значительное количество паразитной энергии, излучаемой радиочастотными устройствами.Эффект прямого прикосновения к электрическому заземляющему слою может снизить почти вдвое частоту, на которой облучаемое тело будет максимально поглощать энергию. ³ Контакт рабочего с поверхностью электрического заземления может сместить частоту максимальной скорости поглощения в полосу частот большинства радиочастотных герметиков и нагревателей; это может увеличить количество энергии, потребляемой рабочим, и ухудшить условия воздействия. Экранирующий материал для радиочастотного излучения, нанесенный на пол, стены и потолок некоторых рабочих помещений для радиочастотного излучения, может составлять такую ​​заземляющую поверхность.

E. Биологические эффекты поглощенной радиочастотной энергии

Подробная информация о некоторых экспериментах, проведенных на лабораторных животных с низкоинтенсивной радиочастотной энергией на частотах, обычно используемых с герметиками и нагревателями, кратко изложена в следующей таблице.

Таблица 1. Некоторые сообщения о биологических эффектах у животных, подвергшихся воздействию радиочастотной энергии
с частотами в диапазоне от 10 до 70 МГц

V. Рекомендации по контролю за опасностями

Немедленные действия

Контроль излучения радиочастотной энергии от радиочастотных герметиков и нагревателей должен основываться на применении правильно спроектированного и установленного защитного материала.Экранирование должно быть размещено на оборудовании или вокруг него, чтобы свести к минимуму профессиональное облучение из-за излучения паразитной радиочастотной энергии. Все экранирующие материалы должны быть правильно заземлены. Для передачи высокочастотного тока следует использовать экранированные проводники, а полное сопротивление тракта должно быть минимизировано за счет использования хороших материалов проводников. Многие из этих функций управления доступны на РЧ уплотнителях и нагревателях, которые поступают на рынок новыми, а некоторые уже используемые машины могут быть оснащены некоторыми из этих функций. Старые машины могут потребовать специальной модификации для контроля паразитных выбросов.

Расстояние между работником и источником излучения радиочастотной энергии должно быть максимальным. Примеры средств для достижения этой цели включают использование устройств автоматической подачи, вращающихся столов и удаленного перемещения материалов.

Радиочастотное уплотняющее и нагревательное оборудование должно быть настроено с помощью электроники, чтобы минимизировать излучаемую паразитную мощность.

По возможности, оборудование должно быть выключено, когда оно не используется. Техническое обслуживание и настройку оборудования следует производить только тогда, когда оборудование не работает.

После проведения технического обслуживания или ремонта все детали машины, включая шкафы, должны быть переустановлены, чтобы оборудование оставалось целым, а его конфигурация не изменялась.

Предупреждения и информация

Доступ к радиочастотным герметикам и нагревателям, где может быть паразитная радиочастотная энергия, должен быть максимально ограничен для оператора и необходимых помощников, обслуживающего персонала и персонала, занимающегося производственной гигиеной или безопасностью. Использование РЧ-оборудования должно быть разрешено только обученному персоналу.

Зоны, в которых установлено значительное воздействие радиочастотной энергии, должны быть отмечены. Знаки должны быть такого размера, чтобы их можно было различить и прочитать с расстояния до трех метров. Все предупреждающие знаки должны быть напечатаны на английском языке и на преобладающем языке рабочих, не читающих по-английски, и должны соответствовать дизайну, рекомендованному OSHA. ⁹

Зоны, в которых РЧ энергия присутствует на уровнях, превышающих допустимый предел воздействия, также должны быть отмечены.Предупреждающие знаки должны содержать следующую дополнительную информацию: ОПАСНОСТЬ – НЕ ВХОДИТЕ. Знак должен быть читаемым с расстояния трех метров. Периметр запретной зоны должен быть четко обозначен знаками, видимыми для всего персонала, приближающегося к этой зоне.

Медицинское наблюдение

Следует разработать программу медицинского наблюдения, адаптированную к ожидаемой степени использования сотрудниками радиочастотного оборудования и потенциальному воздействию радиочастотной энергии. Программа должна включать предварительное обследование всех новых сотрудников и начальное обследование всех присутствующих сотрудников, подвергающихся профессиональному облучению радиочастотной энергией.Чтобы определить возможные побочные эффекты, связанные с воздействием радиочастотной энергии, следует рассмотреть возможность ежегодного обследования рабочих, которые могут подвергаться воздействию радиочастотной энергии на регулярной и долгосрочной основе. Во все экзамены должны быть включены трудовые книжки.

В истории болезни и медицинском осмотре особое внимание следует уделять органам-мишеням, потенциально подверженным воздействию радиочастотной энергии, включая глаза (катаракта), центральную нервную систему, кровь (снижение количества лейкоцитов), систему иммунной защиты и репродуктивную систему.Неблагоприятные репродуктивные эффекты могут быть связаны как с материнским, так и с отцовским воздействием. Для лиц, подвергающихся профессиональному воздействию радиочастотной энергии, медицинские записи, включая истории болезни и трудовые книжки, должны храниться в течение всего периода работы и в течение длительного периода после увольнения.

Измерения воздействия

Зоны производственной среды, в которых уровень радиочастотной энергии определен как значительный, следует обследовать через регулярные промежутки времени. Сразу после физического или электронного изменения оборудования или изменения в процессе также должно быть выполнено полное обследование.Если измерения, проведенные во время обследования, показывают, что профессиональное облучение превышает допустимый предел, следует провести второе обследование в следующий рабочий день. Если предел все же превышен, использование радиочастотного оборудования, создающего чрезмерные значения, следует запретить до тех пор, пока не будут введены соответствующие меры контроля. Таблицы данных обследования должны содержать всю информацию, относящуюся к обследованию, и должны включать дату и время измерения, тип используемого оборудования для мониторинга, имена сотрудников и предпринятые меры по исправлению положения, если таковые имеются.Эти записи должны храниться в течение длительного периода времени.

Список литературы

2. Conover, D.L., W.H. Парр, Э. Сенсинтаффер и У. Мюррей-младший: Измерение напряженности электрического и магнитного поля от промышленных источников энергии с радиочастотой (15-40,68 МГц). In «Биологические эффекты электромагнитных волн: избранные доклады ежегодного собрания USNC / URSI » (Боулдер, Ко, 20–23 октября 1975 г.). C.C. Джонсон и М. Шор, ред., Департамент здравоохранения, образования и социального обеспечения, Служба общественного здравоохранения, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, Бюро радиологического здоровья, публикация DHEW (FDA) № 77-8011, 2 : 356-36Z (1976).
3. Коновер, Д.Л .: Воздействие на персонал РФ (10-40 МГц). Проблемы промышленной гигиены, Конференция Американской ассоциации промышленной гигиены, Новый Орлеан, штат Луизиана, 22–27 мая 1977 г., 10 стр. (1977).
4. Ганди, О.П .: Условия наибольшего воздействия электромагнитной энергии у человека и животных. IEEE Trans. Теория СВЧ. 23 : 1021 = 1029 (1975).
5. Durney, C.H., C.C. Джонсон, П. Барбер, Х. Массуди, М.Ф. Искардер и Дж.К. Митчелл: Справочник по дозиметрии радиочастотного излучения, , 2-е изд., SAM-TR-78-22. База ВВС Брукс, Техас, Департамент ВВС, Командование систем ВВС, Аэрокосмический медицинский отдел, Школа аэрокосмической медицины, 141 стр. (1978).
6. Сердюк, А.М .: Биологический эффект низкоинтенсивных полей сверхвысоких частот. Врач. Дело 11 : 108-111 (1969).
7. Лобанова Е.А., Лобанова А.В. Гончарова: Исследование условнорефлекторной деятельности животных (крысы-альбиносы), подвергшихся воздействию ультракоротких и коротких радиоволн. гиг. Тр. Проф. Забол. 15 (л): 29-33 (1971)
8. Демокидова, Н.К .: Влияние радиоволн на рост животных. В Биологические эффекты радиочастотных электромагнитных полей , З.В. Гордон, изд., Арлингтон, Вирджиния, Служба исследования совместных публикаций США No.63321, стр. 237-242 (1974).
9. Волкова А.П., Петров П.О. Фукалова: Изменение некоторых защитных реакций организма под воздействием УВ в экспериментальных и производственных условиях. В Биологические эффекты радиочастотных электромагнитных полей, З.В. Гордон, изд., Арлингтон, Вирджиния, Служба исследования совместных публикаций США № 633219, стр. 168-174 (1974)
10. Министерство труда, безопасности и гигиены труда США: Стандарты безопасности и здоровья OSHA, 29 CFR 1910.97. OSHA 2206, пересмотренное, 7 ноября 1978 г., Вашингтон, округ Колумбия
.

Радиочастотные (RF) уплотнители и нагреватели pdf icon [PDF – 3,65 MB]

Страница не найдена | Prysmian Group

НАСТОЯЩИЙ ВЕБ-САЙТ (И СОДЕРЖАЩАЯСЯ ЗДЕСЬ ИНФОРМАЦИЯ) НЕ СОДЕРЖИТ И НЕ ЯВЛЯЕТСЯ ПРЕДЛОЖЕНИЕМ НА ПРОДАЖУ ЦЕННЫХ БУМАГ ИЛИ ПРЕДЛОЖЕНИЯ НА ПОКУПКУ ИЛИ ПОДПИСКУ НА ЦЕННЫЕ БУМАГИ В СОЕДИНЕННЫХ ШТАТАХ, АВСТРАЛИИ, КАНАДЕ ИЛИ ЯПОНИИ ПРЕДЛОЖЕНИЕ ИЛИ ЗАЯВЛЕНИЕ ТРЕБУЕТ РАЗРЕШЕНИЯ МЕСТНЫХ ОРГАНОВ ИЛИ ИНАЧЕ БУДЕТ НЕЗАКОННЫМ (« ДРУГИЕ СТРАНЫ, »).ЛЮБОЕ ПУБЛИЧНОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ БУДЕТ ПРОВОДИТЬСЯ В ИТАЛИИ В СООТВЕТСТВИИ С ПЕРСПЕКТИВОМ, ДОЛЖНЫМ ОБРАЗОМ РАЗРЕШЕНО CONSOB В СООТВЕТСТВИИ С ПРИМЕНИМЫМИ НОРМАМИ. ЦЕННЫЕ БУМАГИ, УКАЗАННЫЕ ЗДЕСЬ, НЕ БЫЛИ ЗАРЕГИСТРИРОВАНЫ И НЕ БУДУТ ЗАРЕГИСТРИРОВАНЫ В СОЕДИНЕННЫХ ШТАТАХ В соответствии с Законом США о ценных бумагах от 1933 года с внесенными в него поправками («Закон о ценных бумагах № ») ИЛИ В СООТВЕТСТВИИ С ДРУГИМИ ДЕЙСТВУЮЩИМИ ПОЛОЖЕНИЯМИ СТРАН И НЕ МОГУТ ПРЕДЛОЖИТЬСЯ ИЛИ ПРОДАТЬ В СОЕДИНЕННЫХ ШТАТАХ ИЛИ «U. S. PERSONS », ЕСЛИ ТАКИЕ ЦЕННЫЕ БУМАГИ НЕ ЗАРЕГИСТРИРОВАНЫ В соответствии с Законом о ценных бумагах, ИЛИ ДОСТУПНО ОСВОБОЖДЕНИЕ ОТ РЕГИСТРАЦИОННЫХ ТРЕБОВАНИЙ Закона о ценных бумагах.КОМПАНИЯ НЕ ПРЕДНАЗНАЧЕНА РЕГИСТРАЦИЯ КАКОЙ-ЛИБО ЧАСТИ ПРЕДЛОЖЕНИЙ В СОЕДИНЕННЫХ ШТАТАХ.

ЛЮБОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ ЦЕННЫХ БУМАГ В ЛЮБОМ ГОСУДАРСТВЕ-ЧЛЕНЕ ЕВРОПЕЙСКОЙ ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЗОНЫ (« EEA »), КОТОРОЕ ВЫПОЛНЯЛО ДИРЕКТИВУ ПРОЕКТА (КАЖДЫЙ, « СООТВЕТСТВУЮЩИЙ СТАТУ ЧЛЕНА »), БУДЕТ ПРЕДСТАВЛЯТЬСЯ УТВЕРЖДЕНО КОМПЕТЕНТНЫМ ОРГАНОМ И ОПУБЛИКОВАНО В СООТВЕТСТВИИ С ДИРЕКТИВОМ PROSPECTUS («РАЗРЕШЕННОЕ ПУБЛИЧНОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ ») И / ИЛИ ПРЕДУСМОТРЕННЫМ ИСКЛЮЧЕНИЕМ ПО ДИРЕКТИВЕ PROSPECTUS ОТ ТРЕБОВАНИЯ К ПРЕДЛОЖЕНИЮ НА ПУБЛИКАЦИЮ.

СОГЛАСНО, ЛЮБОЕ ЛИЦО, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЕ ИЛИ НАМЕРЕННОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ ЦЕННЫХ БУМАГ В СООТВЕТСТВУЮЩЕМУ ГОСУДАРСТВЕ-ЧЛЕНАХ, ЗА ИСКЛЮЧЕНИЕМ РАЗРЕШЕННОГО ПУБЛИЧНОГО ПРЕДЛОЖЕНИЯ, МОЖЕТ СДЕЛАТЬ ЭТО ТОЛЬКО В ОБСТОЯТЕЛЬСТВАХ, В КОТОРЫХ НЕТ ОБЯЗАТЕЛЬСТВ ИЛИ КОМПАНИИ ИЛИ ОБЯЗАТЕЛЬСТВ МЕНЕДЖЕРОВ ОПУБЛИКОВАТЬ ПРОЕКТ В СООТВЕТСТВИИ СО СТАТЬЕЙ 3 ДИРЕКТИВЫ ПРОЕКТА ИЛИ ДОПОЛНИТЕЛЬНО ДОПОЛНИТЕЛЬНО В СООТВЕТСТВИИ СО СТАТЬЕЙ 16 ДИРЕКТИВЫ ПРОЕКТА В КАЖДОМ СЛУЧАЕ В ОТНОШЕНИИ ТАКОГО ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

ВЫРАЖЕНИЕ «ДИРЕКТИВА ПРОСПЕКТА» ОЗНАЧАЕТ ДИРЕКТИВУ 2003/71 / EC (ДАННАЯ ДИРЕКТИВА И ПОПРАВКИ К НЕЙ, ВКЛЮЧАЯ ДИРЕКТИВУ 2010/73 / EC, В СТЕПЕНИ, ВНЕДРЕННОЙ В СООТВЕТСТВУЮЩЕМ ГОСУДАРСТВЕ-ЧЛЕНАХ, ВМЕСТЕ С ЛЮБЫМ УЧАСТНИКОМ) .ИНВЕСТОРАМ НЕ СЛЕДУЕТ ПОДПИСАТЬСЯ НА КАКИЕ-ЛИБО ЦЕННЫЕ БУМАГИ, УКАЗАННЫЕ В ДАННОМ ДОКУМЕНТЕ, ЗА ИСКЛЮЧЕНИЕМ ИНФОРМАЦИИ, СОДЕРЖАЩЕЙСЯ В ЛЮБОМ ПЕРСПЕКТИВЕ.

Подтверждение того, что сертифицирующая сторона понимает и принимает вышеуказанный отказ от ответственности.

Информация, содержащаяся в этом разделе, предназначена только для информационных целей и не предназначена и не открыта для доступа никому, кто находится или постоянно проживает в США, Австралии, Канаде, Японии или других странах.Я заявляю, что я не проживаю и не проживаю в США, Австралии, Канаде, Японии или других странах, и я не являюсь «США». Лицо »(согласно Положению S Закона о ценных бумагах). Я прочитал и понял вышеуказанный отказ от ответственности. Я понимаю, что это может повлиять на мои права. Я согласен соблюдать его условия.

Questo SITO интернет (Е LE Informazioni IVI CONTENUTE) НЕ CONTIENE Н.Е. COSTITUISCE UN’OFFERTA Д.И. Vendita Д.И. Strumenti FINANZIARI О РАС SOLLECITAZIONE ДИ ДИ Acquisto Оферта О SOTTOSCRIZIONE Д.И. Strumenti FINANZIARI NEGLI Stati Uniti, в Австралии, Канаде О Giappone О В QUALSIASI ALTRO PAESE NEL QUALE L’OFFERTA O SOLLECITAZIONE DEGLI STRUMENTI FINANZIARI SAREBBERO SOGGETTE ALL’AUTORIZZAZIONE DA PARTE DI AUTORITÀ LOCALI O COMUNQUE VIETATE AI SENSI DI LEGGE (GLI « » PAESI).QUALUNQUE OFFERTA PUBBLICA SARÀ REALIZZATA В ИТАЛИИ SULLA BASE DI UN PROSPETTO, APPROVATO DA CONSOB IN CONFORMITÀ ALLA REGOLAMENTAZIONE APPLICABILE. GLI STRUMENTI FINANZIARI IVI INDICATI NON SONO STATI E NON SARANNO REGISTRATI AI SENSI DELLO US SECURITIES ACT DEL 1933, COME SUCCESSIVAMENTE MODIFICATO (IL « SECURITIES ACT »), O AI SECURITIES ACT », O AI SECURITIES ACT », O AI SENISPOLLE PAINDO NINISPOLLE PAI, CORI. ПРЕДЛОЖЕНИЕ O VENDUTI NEGLI STATI UNITI OA «США ЛИЦА »SALVO CHE I TITOLI SIANO REGISTRATI AI SENSI DEL SECURITIES ACT O IN PRESENZA DI UN’ESENZIONE DALLA REGISTRAZIONE APPLICABILE AI SENSI DEL SECURITIES ACT.NON SI INTENDE EFFETTUARE ALCUNA OFFERTA AL PUBBLICO DI TALI STRUMENTI FINANZIARI NEGLI STATI UNITI.

QUALSIASI DI Strumenti Оферта FINANZIARI В QUALSIASI Stato MEMBRO DELLO SPAZIO ECONOMICO EUROPEO ( « СМ ») CHE ABBIA RECEPITO LA DIRETTIVA PROSPETTI (CIASCUNO ООН « Stato MEMBRO RILEVANTE ») SARA EFFETTUATA SULLA БАЗА DI UN PROSPETTO APPROVATO DALL’AUTORITÀ COMPETENTE E PUBBLICATO IN CONFORMITÀ A QUANTO PREVISTO DALLA DIRETTIVA PROSPETTI (L ‘” OFFERTA PUBBLICA CONSENTITA “) E / O AI SENSI DI UN’ESENZIONE DAL REQUISITO DIRETTIVA PUBBL PUBBL.

CONSEGUENTEMENTE, CHIUNQUE EFFETTUI O INTENDA EFFETTUARE UN’OFFERTA DI Strumenti FINANZIARI В UNO Stato MEMBRO RILEVANTE Диверса ДАЛЛ “Pubblica CONSENTITA Оферта” può FARLO ESCLUSIVAMENTE LADDOVE NON SIA PREVISTO ALCUN OBBLIGO PER LA Societa O UNO DEI СОВМЕСТНОЕ GLOBAL КООРДИНАТОРОВ O DEI МЕНЕДЖЕР DI PUBBLICARE RISPETTIVAMENTE UN PROSPETTO AI SENSI DELL’ARTICOLO 3 DELLA DIRETTIVA PROSPETTO O INTEGRARE UN PROSPETTO AI SENSI DELL’ARTICOLO 16 DELLA DIRETTIVA PROSPETTO, В RELAZIONE СКАЗОЧНОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ.

L’Espressione «DIRETTIVA PROSPETTI» INDICA LA DIRETTIVA 2003/71 / CE (СКАЗКА DIRETTIVA E LE RELATIVE MODIFICHE, нонче LA DIRETTIVA 2010/73 / UE, NELLA MISURA В НПИ SIA RECEPITA NELLO Stato MEMBRO RILEVANTE, UNITAMENTE QUALSIASI MISURA DI ATTUAZIONE NEL RELATIVO STATO MEMBRO). GLI INVESTITORI NON DOVREBBERO SOTTOSCRIVERE ALCUNO STRUMENTO FINANZIARIO SE NON SULLA BASE DELLE INFORMAZIONI CONTENUTE NEL RELATIVO PROSPETTO.

Conferma, который соответствует сертификату и принимает заявление об отказе от ответственности.

У меня есть документы, содержащие информацию, представленную в разделе, посвященном окончательной информативной и не имеющей прямого доступа к получению доступа ко всем частям, которые находятся в Австралии, Канаде или в Джаппоне или Уно дельи Алтри Паэзи. Dichiaro di non essere soggetto резидентом или trovarmi negli Stati Uniti, в Австралии, Канаде или Джаппоне о уно дельи Altri Paesi e di non essere una «лицо США» (ai sensi della Regulation S del Securities Act). Ho letto e compreso il отказ от ответственности sopraesposto.Comprendo Che può condizionare i miei diritti. Accetto di rispettarne i vincoli.

Цитокин-активированные NK-клетки подавляют апоптоз PMN и сохраняют свою функциональную способность | Кровь

Естественные клетки-киллеры (NK) составляют приблизительно от 10% до 15% от общего количества лимфоцитов крови и определяются по отсутствию CD3 и наличию CD56 на их поверхности. ¹ На основании экспрессии CD56 и CD16 их можно разделить на 2 подмножества: CD56 ^dim CD16 ^hi и CD56 ^bright CD16 ^{lo / –} . ^2,3 В периферической крови клетки CD56 ^dim составляют 90% от общего количества NK-клеток. Они являются мощными убийцами и способны уничтожать инфицированные вирусом клетки и опухолевые клетки без предварительной сенсибилизации. Напротив, цитотоксический потенциал клеток CD56 ^bright ограничен, но известно, что они продуцируют большое количество цитокинов и хемокинов, таких как интерферон γ (IFNγ), фактор некроза опухоли α (TNFα), белки воспаления макрофагов (MIP) MIP -1α и MIP-1β и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), которые, в свою очередь, могут рекрутировать другие иммунные клетки и проявлять иммуномодулирующее действие на их функциональную активность. ^4-6

Полиморфноядерные клетки (PMN) фагоцитируют либо напрямую, либо через различные рецепторы (такие как рецепторы Fc, рецепторы комплемента и другие), а затем убивают патогены, продуцируя ферменты, такие как дефенсины, протеазы, факторы, индуцирующие проницаемость, и токсичные реактивные формы кислорода и азота. . ^7-9 У них короткий период полураспада от 6 до 8 часов в обращении. Стареющие PMN и PMN, которые выполнили свою задачу по уничтожению вторгшихся микроорганизмов, подвергаются апоптозу, чтобы предотвратить выброс токсичных компонентов в окружающую среду, которые могут повредить ткань хозяина. ¹⁰ Однако удаление PMN подразумевает снижение способности первой линии защиты быстро устранять патогены. Различные воспалительные цитокины, такие как интерлейкин-1β (IL-1β), IL-2, TNFα, IL-15, IFNγ, фактор, стимулирующий колонии гранулоцитов (G-CSF), GM-CSF, IL-6 и IL-8, и другие медиаторы, такие как липополисахарид (LPS), увеличивают выживаемость PMN. ¹⁰

обладают иммунорегуляторным действием на иммунные клетки, такие как Т-клетки, В-клетки, дендритные клетки (ДК) и моноциты, посредством секреции различных растворимых продуктов и межклеточного контакта. ^11-14 Предыдущие исследования in vitro на моделях человека и мыши изучали влияние PMN на функции NK-клеток. ^15-18 Однако, насколько нам известно, влияние NK-клеток на PMN не изучалось. Поскольку NK-клетки и PMN являются одними из первых клеток, которые рекрутируются в очаг воспаления, взаимное взаимодействие между ними весьма вероятно. В этом исследовании мы исследовали влияние NK-клеток на выживаемость, активацию и функцию PMN. Мы показываем, что растворимые факторы, выделяемые цитокин-активированными NK-клетками, посылают сигналы выживания PMN, что может способствовать их накоплению в течение продолжительных периодов времени в месте воспаления и поддерживать их функции.

Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) отделяли от фильтров крови, полученных из Института трансфузионной медицины Ганноверской медицинской школы, центрифугированием в градиенте плотности фиколла (Biochrom). РВМС окрашивали моноклональными антителами против CD3 PerCP, CD14 Pacific blue и CD56 APC (BD Biosciences) для стробирования NK-клеток, определяемых как CD3 ^– CD14 ^– CD56 ⁺ .Для сортировки NK-клеток CD56 ^dim и CD56 ^bright PBMC окрашивали CD3 PerCP, CD14 PerCP, CD19 PerCP, CD16 APC-H7 (BD Biosciences) и CD56 PE-Cy7 (Beckman Coulter). CD56 ^dim NK-клетки были определены как CD3 ^– CD14 ^– CD19 ^– CD56 ^dim CD16 ^hi , а CD56 ^яркие NK-клетки были определены как CD3 ^– CD14 ^– CD19 ^– CD56 ^{светлый} CD16 ^{lo / –} .NK-клетки были отсортированы на FACSAria (Becton Dickinson) в сортировочном центре Ганноверской медицинской школы. Достигнутая чистота NK-клеток составляла от 95% до 98%.

Это исследование было одобрено наблюдательным советом по этике Медицинской школы Ганновера. Гепаринизированную кровь получали от здоровых взрослых добровольцев, и PMN выделяли, как описано в другом месте. ¹⁹ Чистота была более 95%, что было оценено по размеру и зернистости при проточной цитометрии и исследовании предметных стекол микроскопической цитоцентрифуги.

NK-клетки стимулировали в R10 (среда RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, l-глутамина, пенициллина / стрептомицина и пирувата натрия) с IL-2 (100 Ед / мл; R&D Systems), IL-15 (100 нг / мл), IL-21 (50 нг / мл; Immunotools), IL-12 (100 нг / мл) и / или IL-18 (100 нг / мл; MBL International) в концентрации 1 × 10 ⁶ / мл в течение 18–24 часов. ПМЯ инкубировали в отсутствие или в присутствии супернатантов, полученных из 1 × 10 ⁶ клеток / мл нестимулированных или стимулированных NK-клеток в концентрации 1 × 10 ⁶ клеток / мл в течение 18–24 часов, и оценивали на апоптоз. активация и функция.

PMN имеют короткий период полураспада от 6 до 8 часов в периферической крови, который может увеличиваться после того, как они попали в очаг воспаления. ¹⁰ Мы наблюдали, что прямое совместное культивирование PMN и NK-клеток в присутствии IL-2 задерживало апоптоз PMN и повышало активацию (дополнительный рисунок 1, доступный на веб-сайте Blood ; см. Ссылку на дополнительные материалы в верхней части страницы). онлайн-статья).Чтобы исследовать, был ли наблюдаемый эффект зависимым от межклеточного контакта или опосредованным растворимым фактором, мы культивировали PMN с супернатантами, полученными из нестимулированных или цитокин-активированных NK-клеток. PMN инкубировали с супернатантами IL-2-активированных NK-клеток в течение различных периодов времени от 6 до 48 часов и оценивали апоптоз PMN с помощью проточной цитометрии с использованием окрашивания аннексином и виапробом. На рисунке 1А показан типичный проточный цитометрический анализ апоптоза PMN, где апоптотические клетки были определены как клетки аннексина ⁺ viaprobe ^–, а живые клетки – как клетки аннексина ^– viaprobe ^–.Никаких существенных различий в гибели клеток не наблюдалось в течение первых 6 часов культивирования PMN (рис. 1B). Процент PMN, подвергающихся спонтанному апоптозу, увеличивался в течение от 12 до 48 часов. Однако присутствие стимулированного IL-2 супернатанта NK-клеток ингибировало апоптоз PMN в любой момент времени, с максимумом между 18 и 24 часами, что указывает на то, что эффект был опосредован растворимым фактором. Выживаемость ПЯН увеличилась почти в 2 раза. На основании этих наблюдений, культуры PMN во всех последующих экспериментах проводились с супернатантами от цитокин-активированных NK-клеток в течение 18-24 часов, чтобы установить факторы, участвующие в эффектах, наблюдаемых на PMN.

Рисунок 1

Оценка апоптоза PMN в присутствии цитокин-активированного супернатанта NK-клеток . (A) PMN культивировали в отсутствие (Med) или в присутствии (NK + IL-2) IL-2-активированного супернатанта NK-клеток и окрашивали аннексином и виапробом для определения апоптоза. Клетки аннексина ⁺ viaprobe ^– (верхний левый квадрант) были определены как апоптотические, а клетки аннексина ^– viaprobe ^– (нижний левый квадрант) – как живые.(B) Процент апоптотических PMN определялся в различные моменты времени в отсутствие (Med) или в присутствии (NK + IL-2) надосадочной жидкости активированных IL-2 NK-клеток (n = 1). Точки данных представляют процент апоптотических PMN при культивировании отдельно или с супернатантами от цитокин-активированных NK-клеток. (C) Количественное представление процента апоптозных PMN при культивировании отдельно (Med) или с супернатантами от нестимулированных (NK sup) или IL-2-активированных (NK + IL-2 sup) NK-клеток в течение 18-24 часов, начиная с 24 часов. индивидуальные эксперименты полностью.(D) PMN, культивированные с супернатантами от NK-клеток, стимулированных IL-2, IL-21, IL-15, IL-12, IL-18 или комбинацией IL-12 плюс IL-18 по сравнению с контрольной средой (Med) и PMN, обработанные только цитокинами (n = 5). Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. *** P <.001.

Рисунок 1

Оценка апоптоза PMN в присутствии цитокин-активированного супернатанта NK-клеток . (A) PMN культивировали в отсутствие (Med) или в присутствии (NK + IL-2) IL-2-активированного супернатанта NK-клеток и окрашивали аннексином и виапробом для определения апоптоза.Клетки аннексина ⁺ viaprobe ^– (верхний левый квадрант) были определены как апоптотические, а клетки аннексина ^– viaprobe ^– (нижний левый квадрант) – как живые. (B) Процент апоптотических PMN определялся в различные моменты времени в отсутствие (Med) или в присутствии (NK + IL-2) надосадочной жидкости активированных IL-2 NK-клеток (n = 1). Точки данных представляют процент апоптотических PMN при культивировании отдельно или с супернатантами от цитокин-активированных NK-клеток. (C) Количественное представление процента апоптозных PMN при культивировании отдельно (Med) или с супернатантами от нестимулированных (NK sup) или IL-2-активированных (NK + IL-2 sup) NK-клеток в течение 18-24 часов, начиная с 24 часов. индивидуальные эксперименты полностью.(D) PMN, культивированные с супернатантами от NK-клеток, стимулированных IL-2, IL-21, IL-15, IL-12, IL-18 или комбинацией IL-12 плюс IL-18 по сравнению с контрольной средой (Med) и PMN, обработанные только цитокинами (n = 5). Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. *** P <.001.

Процент апоптозных PMN снижался в 3 раза при культивировании с супернатантами от IL-2-стимулированных NK-клеток по сравнению с контрольной средой (Med против NK + IL-2; P <.001) или в присутствии надосадочной жидкости нестимулированных NK-клеток через 18-24 часа (NK против NK + IL-2; P <0,001; фигура 1C). NK-клетки при стимуляции разными цитокинами демонстрируют разные цитокиновые и хемокиновые профили. ^21-23 Следовательно, в дополнение к IL-2, мы стимулировали NK-клетки с помощью IL-15, IL-21, IL-12, IL-18 и комбинации IL-12 и IL-18, чтобы изучить, действительно ли PMN выживаемость, активация и функция зависят от дифференциальной цитокиновой стимуляции NK-клеток. PMN, культивированные с супернатантами от NK-клеток, которые были стимулированы различными цитокинами, показали повышенную выживаемость по сравнению с PMN, культивированными в контрольной среде или с супернатантом от нестимулированных NK-клеток (рис. 1D).Обработка PMN только цитокинами не оказывала никакого эффекта на апоптоз, что делает прямое воздействие этих цитокинов на выживаемость PMN очень маловероятным. В заключение, эти данные предполагают, что растворимые факторы, высвобождаемые цитокин-активированными NK-клетками, значительно замедляют апоптоз PMN.

При заражении хозяина PMN поглощают вторгшиеся патогены и уничтожают их с помощью окислительных или неокислительных механизмов. Чтобы изучить влияние культуральных супернатантов NK-клеток на функциональные возможности PMN, мы измерили фагоцитоз и продукцию ROS.Фагоцитоз оценивали с помощью анализа на основе проточного цитометра, который определял способность PMN поглощать флуоресцентно меченые латексные шарики размером 1 мкм (рис. 3A). Примерно 50% PMN были способны поглощать латексные шарики размером 1 мкм при культивировании отдельно или в присутствии супернатанта нестимулированных NK-клеток. Напротив, 87% PMN, культивированных с супернатантом IL-2-стимулированных NK-клеток, проявляли фагоцитарную активность (Med против NK + IL-2; P <0,001 и NK против NK + IL-2; P < .001; Рисунок 3B). Супернатанты от NK-клеток, стимулированных различными цитокинами, также были способны сохранять фагоцитарные свойства PMN (рис. 3C). Процент апоптотических PMN обратно коррелировал с процентом PMN, которые были способны выполнять фагоцитоз ( P <0,001; r = -0,96; рисунок 3D). Производство АФК PMN было обнаружено спиновой ловушкой 1-гидрокси-3-карбоксипирролидином. Хотя разница не была статистически значимой, наблюдалось почти 2-кратное увеличение количества супероксида, продуцируемого PMN, в присутствии IL-2-стимулированного супернатанта NK-клеток по сравнению с контрольной средой (рис. 3E).Обработка PMN только цитокинами не оказывала никакого эффекта на фагоцитоз или продукцию ROS, что указывает на то, что эффекты, наблюдаемые на PMN, были результатом факторов, производных от NK-клеток. Таким образом, культуральные супернатанты цитокин-активированных NK-клеток не только спасали PMN от апоптоза, но и сохраняли свою функциональную компетентность.

Рисунок 3

Оценка функциональных свойств PMN .Функциональные свойства PMN оценивали в отсутствие или в присутствии IL-2-активированного супернатанта NK-клеток через 18–24 часа культивирования. (A) Типичный FACS-анализ PMN, совпадающих с 1-мкм флуоресцентно меченными латексными шариками в отсутствие (левая панель) или в присутствии IL-2-активированных NK-клеток супернатанта (правая панель). Заштрихованные профили представляют поглощение при инкубации PMN на льду, а открытые профили представляют активное поглощение при 37 ° C. Указан процент PMN, фагоцитирующих латексные шарики размером 1 мкм.(B) Количественное представление поглощения шариков PMNs из 4 отдельных экспериментов. (C) Оценка фагоцитарной способности PMN при культивировании с супернатантами от NK-клеток, стимулированных IL-2, IL-21, IL-15, IL-12, IL-18 или комбинацией IL-12 плюс IL-18. (n = 1). (D) Корреляционный анализ между процентом апоптотических PMN и процентом фагоцитирующих PMN. (E) Количественное представление количества супероксида, продуцируемого PMN, в 3 отдельных экспериментах. Количество супероксида, производимого PMN, определяли путем измерения электронного спина супероксидного радикала.Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. *** P <.001.

Рисунок 3

Оценка функциональных свойств PMN . Функциональные свойства PMN оценивали в отсутствие или в присутствии IL-2-активированного супернатанта NK-клеток через 18–24 часа культивирования. (A) Типичный FACS-анализ PMN, совпадающих с 1-мкм флуоресцентно меченными латексными шариками в отсутствие (левая панель) или в присутствии IL-2-активированных NK-клеток супернатанта (правая панель). Заштрихованные профили представляют поглощение при инкубации PMN на льду, а открытые профили представляют активное поглощение при 37 ° C.Указан процент PMN, фагоцитирующих латексные шарики размером 1 мкм. (B) Количественное представление поглощения шариков PMNs из 4 отдельных экспериментов. (C) Оценка фагоцитарной способности PMN при культивировании с супернатантами от NK-клеток, стимулированных IL-2, IL-21, IL-15, IL-12, IL-18 или комбинацией IL-12 плюс IL-18. (n = 1). (D) Корреляционный анализ между процентом апоптотических PMN и процентом фагоцитирующих PMN. (E) Количественное представление количества супероксида, продуцируемого PMN, в 3 отдельных экспериментах.Количество супероксида, производимого PMN, определяли путем измерения электронного спина супероксидного радикала. Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. *** P <.001.

Чтобы исключить возможность влияния каких-либо контаминирующих клеток, таких как Т-клетки, на ПМЯ, мы культивировали ПМЯ с супернатантами, полученными из Т-клеток, стимулированных ИЛ-2, в течение 18–24 часов. Мы обнаружили, что супернатанты Т-клеток, стимулированных IL-2, не оказывали никакого влияния на выживаемость и активацию PMN (дополнительная фигура 2).Это указывает на то, что эффекты, наблюдаемые на PMN, были результатом супернатантов, полученных из IL-2-активированных NK-клеток, а не результатом контаминации Т-клетками. Мы также культивировали PMN с супернатантами, полученными из клонов NK-клеток (CNK6), стимулированных различными цитокинами (IL-2, IL-15, IL-21, IL-12, IL-18 и IL-12 + IL-18; дополнительные Рисунок 3). Преимущество использования клонов NK-клеток состоит в том, что они полностью свободны от каких-либо контаминирующих клеток, таких как моноциты или Т-клетки, поскольку они происходят из одной NK-клетки.Мы обнаружили, что активированные цитокинами супернатанты CNK6 вызывали аналогичные эффекты на PMN, как и очищенные активированные NK-клетки. PMN выживают дольше, с повышенной экспрессией CD11b и сниженной экспрессией CD62L, что указывает на то, что растворимые факторы, полученные из активированных NK-клеток человека и клонов NK-клеток, имеют одинаковый эффект на PMN.

В нашей экспериментальной установке PMN культивировали с супернатантами культивированных NK-клеток. Следовательно, эффекты, наблюдаемые на PMN, были результатом растворимых факторов, высвобождаемых NK-клетками, и не зависели от межклеточного контакта.Используя анализ CBA, мы обнаружили, что большие количества GM-CSF, TNFα и IFNγ продуцируются цитокин-активированными общими NK-клетками и NK-клетками CD56 ^bright . Таким образом, чтобы исследовать, были ли эффекты, производимые супернатантами NK-клеток на PMNs, результатом этих цитокинов, мы заблокировали их активность с помощью нейтрализующих агентов. Задержка апоптоза PMN, наблюдаемая при культивировании с IL-2-активированным супернатантом NK-клеток, частично ингибировалась блокированием активности GM-CSF и IFNγ (фиг. 6A).Напротив, присутствие нейтрализующих агентов в культуре PMN с супернатантом от IL-12 плюс IL-18-активированных NK-клеток не влияло на пролонгированную выживаемость PMN (фиг. 6B).

Рисунок 6

Влияние нейтрализующих агентов против IFNγ, TNFα и GM-CSF на выживаемость, активацию и функцию PMN в присутствии супернатантов от цитокин-активированных NK-клеток . PMN культивировали в отсутствие или в присутствии супернатантов от нестимулированных (NK sup) или цитокин-активированных NK-клеток в течение 18-24 часов и сравнивали с контрольной средой (Med) и PMN, обработанными только цитокинами.К культурам PMN в наличие супернатантов цитокин-активированных NK-клеток в различных комбинациях. Количественное представление (AB) процента апоптотических PMN (n = 4), (CD) кратного увеличения экспрессии CD11b (n = 4), (EF) экспрессии CD62L на поверхности PMN (n = 4) и (G) процент фагоцитирующих PMN (n = 1). Увеличение кратности рассчитывали как MFI CD11b на PMN для различных условий, деленное на MFI PMN при культивировании отдельно (контрольная среда; Med).Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. * P <.05; ** P <0,01; *** P <.001.

Рисунок 6

Влияние нейтрализующих агентов против IFNγ, TNFα и GM-CSF на выживаемость, активацию и функцию PMN в присутствии супернатантов от цитокин-активированных NK-клеток . PMN культивировали в отсутствие или в присутствии супернатантов от нестимулированных (NK sup) или цитокин-активированных NK-клеток в течение 18-24 часов и сравнивали с контрольной средой (Med) и PMN, обработанными только цитокинами.К культурам PMN в наличие супернатантов цитокин-активированных NK-клеток в различных комбинациях. Количественное представление (AB) процента апоптотических PMN (n = 4), (CD) кратного увеличения экспрессии CD11b (n = 4), (EF) экспрессии CD62L на поверхности PMN (n = 4) и (G) процент фагоцитирующих PMN (n = 1). Увеличение кратности рассчитывали как MFI CD11b на PMN для различных условий, деленное на MFI PMN при культивировании отдельно (контрольная среда; Med).Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. * P <.05; ** P <0,01; *** P <.001.

Повышающая регуляция экспрессии PMN CD11b при культивировании клеток с IL-2-активированным супернатантом NK-клеток отменялась в присутствии блокирующих агентов против GM-CSF, TNFα и IFNγ (NK + IL-2 vs NK + IL -2 + анти- [G + T + I]; P <0,01; Рисунок 6C). Хотя разница не была статистически значимой, присутствие одного только антитела против GM-CSF также частично ингибировало повышающую регуляцию CD11b, что указывает на критическую роль GM-CSF в повышении экспрессии CD11b.Напротив, было только частичное снижение экспрессии CD11b на PMN при культивировании с супернатантом NK-клеток, стимулированных IL-12 плюс IL-18, в присутствии блокирующих агентов против всех 3 цитокинов (фигура 6D).

Блокирование активности GM-CSF и TNFα увеличивало поверхностную экспрессию CD62L на PMN при культивировании в присутствии IL-2-активированного супернатанта NK-клеток (фиг. 6E). Как описано ранее, культивирование PMN с супернатантами NK-клеток, стимулированных IL-12 плюс IL-18, приводило к выделению CD62L.Эта потеря экспрессии CD62L была почти полностью заблокирована в присутствии нейтрализующих агентов (NK + IL-12 + IL-18 против NK + IL-12 + IL-18 + анти- [G + T + I]; P < .001; Рисунок 6F). Комбинации блокирующих агентов против GM-CSF и TNFα также было достаточно для отмены выделения CD62L с поверхности PMN (NK + IL-12 + IL-18 против NK + IL-12 + IL-18 + анти- [G + T ]; P <.01). Напротив, блокирование активности этих цитокинов не оказывало никакого эффекта на сохраненную фагоцитарную способность PMN при культивировании с супернатантами от IL-2-активированных NK-клеток (рис. 6G).IL-15-активированные супернатанты NK-клеток вызывали аналогичные эффекты на PMN, как супернатанты от IL-2-активированных NK-клеток (дополнительная фигура 4).

Мы также использовали рекомбинантные IFNγ, TNFα и GM-CSF для оценки их влияния на выживаемость и статус активации PMN. В соответствии с другими исследованиями, ^28-30 мы обнаружили, что PMN, культивируемые с GM-CSF, IFNγ и TNFα в различных комбинациях, ингибируют апоптоз PMN и индуцируют активацию (дополнительная фигура 5).Таким образом, наши данные показывают, что растворимые факторы, продуцируемые цитокин-активированными NK-клетками, увеличивают выживаемость PMN, индуцируют активацию и сохраняют их функциональную компетентность. Мы также демонстрируем, что IFNγ, GM-CSF и TNFα, секретируемые NK-клетками, играют решающую роль в опосредованных NK-клетками эффектах на PMN.

обладают иммуномодулирующим действием на другие иммунные клетки, такие как DC, T-клетки, B-клетки, моноциты и макрофаги, посредством секреции цитокинов и хемокинов. ^11-14,31 В этом исследовании мы впервые сообщаем об антиапоптотическом действии NK-клеток на PMN. Наши результаты показали, что растворимые факторы, полученные из цитокин-активированных NK-клеток, обладают потенциалом для продления выживаемости PMN. ПМЯ не только выжили дольше, но и сохранили свою способность осуществлять фагоцитоз и продуцировать АФК. Антиапоптотический эффект NK-клеток на PMN индуцировался только при стимуляции цитокинами.

При инфицировании хозяина NK-клетки, наряду с PMN, являются одними из первых клеток, которые рекрутируются в очаг воспаления, что свидетельствует о двустороннем перекрестном взаимодействии между двумя типами клеток.Различные мышиные модели успешно продемонстрировали роль NK-клеток в бактериальных инфекциях. ^18,32,33 PMN и NK-клетки, как было показано, также играют роль в определенных воспалительных состояниях, таких как ревматоидный артрит (RA). ^34,35 Таким образом, мы взяли синовиальную жидкость у 2 пациентов с РА и обнаружили как NK-клетки, так и PMN с помощью проточной цитометрии (дополнительный рисунок 6). Большинство NK-клеток в синовиальной жидкости принадлежало к субпопуляции CD56 ^bright , что согласуется с предыдущим исследованием Pridgeon et al. В 2003 году. ³⁵ Таким образом, это наблюдение свидетельствует о возможном прямом / косвенном взаимодействии между NK-клетками и PMN в местах воспаления. Большинство исследований, посвященных взаимодействию между NK-клетками и PMN, сосредоточено на влиянии PMN на функции NK-клеток. ^15-18 Однако, насколько нам известно, влияние NK-клеток на биологию PMN не изучалось. Поэтому мы исследовали влияние человеческих NK-клеток на выживаемость и функцию PMN. Гибель клеток PMN задерживалась после инкубации с супернатантами от цитокин-активированных NK-клеток.Присутствие IL-2-активированного супернатанта NK-клеток почти вдвое увеличивало период полужизни PMN по сравнению с PMN, культивированными отдельно или с супернатантом от нестимулированных NK-клеток. Цитокиновый и хемокиновый профиль NK-клеток различается в зависимости от выбора цитокинов, используемых для стимуляции NK-клеток. ^21-23 Следовательно, в дополнение к IL-2 мы также использовали IL-15, IL-21, IL-12, IL-18 и комбинацию IL-12 плюс IL-18 для стимуляции NK-клеток. Известно, что IL-15, IL-12 и IL-18 продуцируются активированными макрофагами в ответ на инфекцию и бактериальные компоненты, ²³ , которые, в свою очередь, запускают ответ NK-клеток.Переход от врожденного иммунного ответа к адаптивному приведет к тому, что примированные Т-клетки будут продуцировать IL-2 и IL-21, что приведет к активации NK-клеток. Все супернатанты NK-клеток, стимулированные различными цитокинами, обладают потенциалом для продления выживаемости PMN в культуре. Тот факт, что супернатанты от нестимулированных NK-клеток не были способны задерживать апоптоз PMN, подчеркивает важность запуска активности NK-клеток для опосредования этого эффекта, как показано в наших условиях цитокиновой стимуляцией. Таким образом, наши данные предполагают, что только при определенных воспалительных условиях, то есть в присутствии цитокинов, NK-клетки способны продлевать выживаемость PMN.

NK-клеток можно разделить на 2 подмножества, CD56 ^dim CD16 ^hi и CD56 ^bright CD16 ^{lo / –} NK-клетки, на основе их экспрессии CD56 и CD16. Клетки ^2,3 CD56 ^dim CD16 ^hi обладают более высоким цитотоксическим потенциалом, тогда как NK-клетки CD56 ^bright CD16 ^{lo / –} известны как более мощные продуценты цитокинов. ^4-6 Чтобы оценить роль этих подмножеств во взаимодействии NK-PMN, NK-клетки были отсортированы на клетки CD56 ^dim и CD56 ^bright и стимулированы либо IL-2, либо IL-12 плюс IL-18.Супернатанты от активированных цитокинами клеток CD56 ^dim и CD56 ^bright были способны задерживать апоптоз PMN по сравнению с PMN, культивируемыми отдельно. Не было разницы в их способности ингибировать апоптоз PMN, что указывает на то, что факторы, ответственные за ингибирование апоптоза PMN, продуцируются обоими подмножествами NK-клеток.

PMN, по-видимому, связан с потерей функций клеток, таких как фагоцитоз и продукция ROS, и снижением экспрессии рецепторов, которые играют важную роль в функции и миграции PMN. ³⁶ Таким образом, мы изучили экспрессию CD11b и CD62L на PMN, поскольку повышающая регуляция CD11b вместе с выделением CD62L являются обычно используемыми маркерами активации нейтрофилов in vitro. ^24,25 CD62L участвует в миграции и накоплении, тогда как молекулы CD11b / CD18, как известно, регулируют несколько других функций PMN, таких как хемотаксис, фагоцитоз и продукция ROS. ^26,27 Хотя CD11b / CD18 не требуется для ингибирования гибели клеток PMN in vivo, исследования in vitro показывают, что перекрестное связывание CD11b или CD11a приводит к задержке апоптоза PMN. ³⁷ Таким образом, регуляция молекул адгезии, по-видимому, модулирует выживаемость PMN. Супернатанты от общих или отсортированных NK-клеток, стимулированных различными цитокинами, спасали PMN от апоптоза, но вызывали дифференциальную активацию с точки зрения экспрессии CD11b и CD62L. Это предполагает, что продукция одного или нескольких общих факторов практически всеми NK-клетками при стимуляции разными цитокинами ответственна за задержку апоптоза PMN. Однако уровни экспрессии CD11b и CD62L, по-видимому, регулируются растворимыми медиаторами, которые секретируются NK-клетками только при стимуляции определенными цитокинами.Костимуляция как IL-12, так и IL-18 вызывает более сильный цитокиновый ответ NK-клеток по сравнению с индивидуальной стимуляцией IL-12 или IL-18. ²³ Это могло бы объяснить разницу в уровне экспрессии CD62L и CD11b, индуцированной в PMN супернатантами NK-клеток, стимулированных комбинацией IL-12 и IL-18, по сравнению с супернатантами от NK-клеток, стимулированных IL-12 и IL- 18 отдельно. Поскольку NK-клетки CD56 ^dim составляют 90% от общего количества NK-клеток, производные от них растворимые факторы ³ модулировали экспрессию CD62L и CD11b на PMN до уровней, сравнимых с активированным общим супернатантом NK-клеток.Предыдущая литература показывает, что NK-клетки CD56 ^bright при стимуляции различными комбинациями физиологических стимулов продуцируют более высокие количества цитокинов и хемокинов по сравнению с NK-клетками CD56 ^dim . ²³ Это могло быть правдоподобным объяснением того, что супернатанты цитокин-активированных NK-клеток CD56 ^bright имели более выраженное влияние на активацию PMN, чем CD56 ^dim NK-клетки. Мы наблюдали, что хотя супернатанты от нестимулированных отсортированных подмножеств NK-клеток приводили к незначительным антиапоптотическим эффектам и небольшой активации PMN, это различие не было статистически значимым и, возможно, могло быть результатом активации подмножеств во время процедур сортировки.Таким образом, наши результаты показывают, что статус активации PMN, но не выживаемость, зависит от типа цитокинов, которые активируют NK-клетки, что, в свою очередь, определяет тип выделяемых ими медиаторов воспаления.

Подавление CD62L и усиление экспрессии CD11b способствует накоплению выживших PMN в месте воспаления и поддерживает устранение инфекционных патогенов. Основная функция PMN заключается в фагоцитозе микроорганизмов и их уничтожении с помощью окислительных или неокислительных механизмов. ^9,38 Поэтому мы оценили влияние NK-клеток на функциональную компетентность PMN, измеряя их продукцию ROS и фагоцитарную активность. В присутствии стимулированных IL-2 супернатантов NK-клеток PMN сохраняли свою функциональную способность в отношении продукции ROS и фагоцитоза. Мы показываем, что длительная выживаемость PMN коррелировала с сохранением их фагоцитарной способности. Хотя растворимые факторы, полученные из NK-клеток, стимулированных различными цитокинами, были способны сохранять фагоцитарную способность PMN, уровни экспрессии CD11b и CD62L не были сопоставимы.Отсутствие корреляции между статусом активации PMN и их функциональностью можно объяснить тем фактом, что, помимо фагоцитоза и продукции ROS, существуют другие функции PMN, такие как адгезия, хемотаксис, дегрануляция и антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность. , которые также регулируются этими молекулами. ³⁹ Таким образом, мы демонстрируем, что PMN не только выживали дольше в присутствии растворимых факторов, происходящих из цитокин-активированных NK-клеток, но также сохраняли свою функциональную активность в отношении фагоцитоза и производства ROS.

Количественный анализ выявил продукцию TNFα, GM-CSF и IFNγ активированными IL-2– или IL-12 плюс IL-18 полными NK-клетками и IL-2-активированными NK-клетками CD56 ^bright в больших количествах. Это наблюдение подтверждает предыдущие выводы о том, что NK-клетки CD56 ^bright более эффективны в производстве цитокинов и что комбинация IL-12 и IL-18 является более сильным стимулом для NK-клеток, чем другие. ²³ Эти данные побудили нас исследовать участие TNFα, GM-CSF и IFNγ в опосредованных NK-клетками эффектах на PMN. Поэтому мы блокировали активность этих цитокинов, когда PMN культивировали с супернатантами цитокин-активированных NK-клеток. Хотя влияние на апоптоз PMN и экспрессию CD11b подавлялось лишь частично, подавление CD62L на PMN было полностью отменено. Мы наблюдали, что PMN, обработанные IL-18, в отличие от обработанных другими цитокинами, также приводили к некоторому выделению CD62L, но эффект был более выраженным, когда PMN культивировались с супернатантом NK-клеток, стимулированных как IL-12, так и IL-18.Последний эффект можно было полностью исключить при добавлении нейтрализующих агентов против GM-CSF и TNFα. Мы также наблюдали, что рекомбинантный IFNγ усиливал экспрессию CD62L на PMN. Momose et al. Продемонстрировали на эозинофилах, что повышенная экспрессия CD62L с помощью IFNγ является результатом повышенного синтеза циклического АМФ и белка, тем самым предоставив правдоподобное объяснение нашему наблюдению. ⁴⁰ Это означает, что, хотя IL-18 может оказывать незначительное влияние на PMN, GM-CSF, IFNγ и TNFα, продуцируемые NK-клетками, играют более доминирующую роль в экспрессии CD62L на PMN.

Однако, как упоминалось ранее, задержка апоптоза PMN и повышающая регуляция CD11b подавлялись лишь частично. Неполное обращение этих эффектов, наблюдаемое в PMNs, культивируемых с супернатантами NK-клеток, активируемых цитокинами, в присутствии блокирующих агентов, могло иметь два возможных объяснения. Во-первых, это могло означать, что используемые в системе нейтрализующие антитела не могли полностью блокировать действие цитокинов.Однако после разбавления супернатанта цитокин-активированных NK-клеток от одного из наших доноров мы обнаружили, что блокирование активности GM-CSF, IFNγ и TNFα может полностью отменить опосредованные NK-клетками эффекты на PMN с точки зрения увеличения CD11b. регуляция и задержка апоптоза (дополнительный рисунок 7), что указывает на их доминирующую роль в опосредованных NK-клетками эффектах на PMN. Во-вторых, мы не исключаем возможности дополнительных неидентифицированных факторов NK-клеток, которые могут опосредовать аналогичные эффекты на PMN.

Предыдущие исследования показали, что несколько цитокинов, таких как TNFα, IFNγ, GM-CSF, IL-6, IL-1β и G-CSF, некоторые из которых продуцируются активированными NK-клетками, ²¹ участвуют в усилении PMN выживание, активация и функция. ^28-30 В соответствии с этими сообщениями мы наблюдали, что PMN, обработанные рекомбинантным TNFα, IFNγ и GM-CSF в различных комбинациях, выживали дольше и были сильно активированы.Эффекты, индуцированные этими рекомбинантными цитокинами на PMN, были сопоставимы с эффектами, наблюдаемыми при использовании цитокин-стимулированных супернатантов NK-клеток. Таким образом, мы продемонстрировали, что GM-CSF, IFNγ и TNFα, продуцируемые IL-2– или IL-12 плюс IL-18-активированные общие NK-клетки и IL-2-активированные NK-клетки CD56 ^bright in vitro, играют решающую роль. в спасении PMN от апоптоза, индукции активации и сохранении их функции.

Цитокиновая среда, индуцированная при инфицировании хозяина, определяет цитокиновый и хемокиновый профиль NK-клеток. ²³ Наше исследование предоставляет доказательства роли растворимых факторов, продуцируемых NK-клетками, на выживаемость и функцию PMN. Мы демонстрируем, что NK-клетки при активации цитокинами секретируют медиаторы воспаления, которые продлевают продолжительность жизни PMN, способствуют их накоплению в течение длительных периодов времени и сохраняют свою функциональную способность уничтожать вторгающиеся патогены. Основываясь на наших выводах, мы считаем, что наше исследование может иметь значение для заболеваний, связанных с нарушением функции NK-клеток и PMN. Например, у пациентов, инфицированных ВИЧ-1, NK-клетки обладают недостаточной выработкой цитокинов и цитотоксической активностью. ⁴¹ PMN от этих пациентов, как было показано, претерпевают ускоренный спонтанный апоптоз, дефектные окислительные всплески и фагоцитоз. ^42-44 Следовательно, разумно предположить, что нарушение продукции медиаторов воспаления NK-клетками может, по крайней мере частично, быть причиной нарушения функции PMN.

Онлайн-версия этой статьи содержит дополнение с данными.

Расходы на публикацию этой статьи были частично оплачены за счет оплаты страницы.Поэтому и исключительно для того, чтобы указать на этот факт, данная статья помечена как «реклама» в соответствии с разделом 18 USC 1734.

Обзор – РФ распыленные пленки Ga2O3